复方丹参滴丸对骨髓基质细胞移植后梗塞大鼠心功能及梗塞面积的影响

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1、复方丹参滴丸对骨髓基质细胞移植后梗塞大鼠心功能及梗塞面积的影响作者：李艳芬，孙兰军，赵英强，徐强，杜桂琴【摘要】　　目的探讨复方丹参滴丸（CDDP）干预骨髓基质细胞（BMSC）移植治疗急性心肌梗塞（AMI）后，是否对心功能及梗塞面积改善有促进作用。方法利用SD大鼠建立AMI模型，体外分离、培养、鉴定同种异体大鼠的BMSC，选用3～4代BMSC，移植于心梗模型大鼠体内，移植后给予不同方法干预。术前、术后4周采用超声心动图检测大鼠心脏结构和功能指标。术后4周，取大鼠心肌组织，氯化硝基四氮唑蓝（NBT）染色，测定心肌梗塞面积。结果①术前各组心脏结构和功能指标比较，差异无显著性(P&

2、gt;0.05)。术后4周，各手术组舒张末期左室后壁厚度（LVPSC移植+G-CSF（粒细胞集落刺激因子）组、BMSC移植+CDDP组增大(EF降低)幅度最小，与模型组比较P<0.05，两组之间比较无显著性差异(P>0.05)。②术后4周，各手术组心室肌组织均有不同程度梗塞，各治疗组均有减小梗塞面积的趋势，与模型组比较有显著性差异（P<0.01）；BMSC移植+CDDP组、BMSC移植+G-CSF组与BMSC移植组比较梗塞面积减轻程度有显著性差异（P<0.05），两组之间无显著性差异（P>0.05）。结论CDDP可能通过干预大鼠AMI后植入干细胞

3、的成活分化，减小心肌梗塞面积，有益心功能改善。【关键词】复方丹参滴丸；骨髓基质细胞；急性心肌梗塞；梗塞面积；心功能AMI为冠心病严重类型，指冠状动脉急性闭塞，血流中断，所引起的局部心肌的缺血性坏死，临床表现可有持久的胸骨后疼痛、休克、心律失常和心力衰竭，并有血清心肌酶增高以及心电图的改变。目前AMI的治疗有药物和手术干预等措施。包括药物治疗在内的措施，能挽救部分濒死心肌，在一定程度上改善心功能但却无法增加患者存活心肌细胞数量。干细胞移植作为一种新兴的生物学方法，对缩小心肌梗塞的范围，限制梗塞灶的扩大，替代梗塞心肌，阻止梗塞后心肌重构，改善心脏功能，有强大潜力。目前，国内外常用

4、的诱导干细胞分化的药物有5-氮胞苷、二甲基亚砜等。本实验采用CDDP作为诱导剂，旨在研究中药是否能提高BMSC对心肌梗塞的修复与可能的机制。　　1材料与仪器　　1.1动物雄性SD大鼠，体质量80～100g（细胞培养）、200～250g（造模），由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：scxk京2007-0001。　　1.2材料与仪器复方丹参滴丸（天津天士力集团），重组人粒细胞刺激因子（杭州九源基因工程有限公司），胎牛血清（美国GIBCO公司），DMEM-LG干粉培养基（美国GIBCO公司），氯化硝基四氮唑蓝（美国Sigma公司），流式细胞仪（美国Becton-D

5、ikinson公司），彩色超声心动仪（GEL-400型，9MHz矩阵探头），TKR-200C型小动物呼吸机，多导生理仪（美国Biopac公司），电子天平（MettlerAL204，瑞士）。　　2方法　　2.1BMSC的体外分离、培养与纯化80～100g雄性SD大鼠，引颈脱臼处死。严格无菌条件取出其双侧股骨和胫骨，用DMEM培养基对骨髓腔进行反复冲洗，至骨变白，将收集液以1000r/min，20℃，离心8min,弃上清液，加入全培养基，置入37℃，5%CO2饱和湿度环境中培养。根据BMSC贴壁生长的特性，每隔3～4d换液1次，弃去未贴壁的其它细胞。经过数次换液后，未贴壁细胞和贴

6、壁细胞中自我更新能力差的细胞逐渐除去，从而得到比较纯化的BMSC。待增殖细胞铺满瓶底80%～90%时，用0.125%的胰酶（含0.005%EDTA）进行消化传代，传代后继续培养，直至得到较纯化的BMSC。　　2.2BMSC的鉴定消化细胞后，取单细胞悬液100μl，分别加入荧光标记单克隆抗体小鼠抗大鼠FITC-IgG1CD31，CD45，CD-90，PE-IgG1CD34，CD106抗体工作液10μl，阴性对照小鼠IgG1-PE，小鼠IgG1，k-PE小鼠IgG1-FITC，进行流式细胞仪鉴定。　　2.3实验分组实验大鼠随机分为正常组、模型组、BMSC移植组、CDDP+BMSC

7、移植组、G-CSF+BMSC移植组。CDDP+BMSC移植组，术后灌服丹参滴丸悬浊液28d，68.52mg/kg，1次/d；G-CSF+BMSC移植组皮下注射G-CSF5d，2mL/kg，1次/d。各组均给普食，自由饮水。　　2.4大鼠急性心肌梗塞模型的建立和BMSC的移植10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，气管切开插管，连接小动物呼吸机，待呼吸平稳后，于左侧胸部3～4肋间逐层开胸，暴露心脏，挑破心包，用5/0无损缝合线在左冠状动脉前降支中1/2处结扎，观察多导生理仪记录的心电图标准Ⅱ导联，见到ST段弓背抬