骨髓基质细胞脑室移植对脑缺血损伤后神经功能恢复的影响

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1、中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．论文作者签名：中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文

2、或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、缩印或其他手段保存论文。论文作者签名：l隆避特蝴张瓣骨髓基质细胞脑室移植对脑缺血损伤后神经功能恢复的影响刖暑长久以来人们一直认为中枢神经系统损伤后神经细胞不能再生，但现代观点认为哺乳动物中枢神经系统损伤后仍具再生潜力，并且有许多研究表明了骨髓基质细胞(bonemarrowstromalceUs，BMSCs)也是神经细胞的前体细胞。有学者经研究证

3、实，BMSCs在体外可分化为神经样细胞，并且可在脑源性神经营养因子(brain—derivedneurotrophicfactor，BDNF)、碱性成纤维生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，b—FGF)的诱导或与脑组织细胞共同培养的条件下，分化为具有神经元和胶质细胞特异蛋白标志的细胞。体内实验也表明，BMSCs可分化为神经样细胞。此外，研究还发现BMSCs具有在脑内迁移的倾向。近年来国内外许多学者通过局部、动脉、静脉植入BMSCs均发现其在中枢神经系统内能够长时间存活，并集聚于脑损伤区，同时还发现BMSCs有着向神经细胞分化的表现，使神经功能得到明显的

4、改善。另外BMSCs对中枢神经系统的内源性神经干细胞也有着积极的影响作用，可促进神经再生及可塑性的增强。现已阐明，脑脊液适宜BMSCs的存活及向神经样细胞的分化。以上研究为我们的实验提供了可靠的依据。本实验采用脑室系统注入体外培养的BMSCs，观察其对神经功能损伤修复的影响及其在脑内的存活、迁移、分化情况。材料与方法将28只Wistar大鼠随机分为A组：假手术组(n=6)，B组：梗塞组(n=8)，C组：梗塞后移植组(n=14)。C组随机分为：C。组：梗塞半球移植组(n=7)，C：组：健侧半球移植组n=7)。梗塞后次日将培养的BMSCs悬液注入c组大鼠侧脑室，B组注入等量的PBS缓冲

5、液。通过神经功能评分观-l·察大鼠脑神经功能恢复情况，同时通过免疫组织化学方法观察移植入脑的BMSCs的存活、迁移及分化情况。结果1．神经功能缺损评价：神经功能缺损评分表明：A组动物(假手术组)无神经功能缺损。移植前B、C两组梗塞后大鼠神经功能损害评分元显著性差异(P>0．05)，移植2周后梗塞大鼠神经功能均有不同程度恢复，但c组评分明显低于B组，c：组、c：组与对照组比较均有统计学差异(P<0。05)；而C，组与c：组的神经功能缺损评分在移植前及移植后比较均元显著性差异(P>0．05)。2．HE染色：大脑中动脉梗塞大鼠的脑缺血区组织稀疏，细胞数量明显减少且间隙增大。假手术组则无此

6、表现，表明大鼠脑梗塞模型制作成功。3．免疫组织化学染色：光学显微镜下观察脑组织切片，可见来源于BMSCs的细胞(BrdU+细胞经免疫组化染色呈暗棕色)在脑组织内存活，并且聚集于缺血梗死区域。在C，组对侧半球脑组织内未发现Bfdu+细胞；在C：组仅在移植损伤道周围发现少量BrdU+细胞。应用免疫双标染色随机选取lo个BrdU+细胞区域计数发现大脑中动脉梗塞后14天约1．2％的Brdu+细胞同时表达神经元标志蛋自特异性烯醇化酶，约6％的B卜du+细胞同时表达神经胶质细胞标志神经胶质纤维酸性蛋白。讨论本实验利用大鼠脑梗塞模型，发现在梗塞后14天，侧脑室移植体外培养的BMSCs组大鼠神经功

7、能恢复明显优予未移植组。此外，本实验在大鼠侧脑室植入BMSCs2周后神经功能评分显示：梗塞半球移植组同健侧半球BMSCs移植组比较，神经功能缺损评分无明显差异。表明这两条途径的脑脊液移植BMSCs对大鼠脑缺血后的神经系统损伤的治疗作用无明显差异。说明BMSCs可在脑脊液中自由移动，其原因可能是BMSCs随脑脊液循环迁移至损伤脑组织附近脑室，这为我们在将来的临床实际应用中提供了更多的移植途径。例如，可以通过腰池穿刺植入BMSCs来治疗中枢神经系统·2·的损伤。这在很大程