cd24分子通过自噬途径调控肝细胞肝癌索垃菲尼耐药的机制研究

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1、分类号：Ｒ７３０．５单位代码：１０３１２密级：学号２０１５１０６７：硕士学位论文题目：ＣＤ２４分子通过自噬途径调控肝细胞肝癌索拉菲尼耐药的机制研究研究生：陆帅指导教师：陈云教授学科专业：免疫学学院名称：南京医科大学基础医学院完成时间二一：〇八年四月分类号：R730.5单位代码：10312密级：学号：20151067硕士学位论文题目：CD24分子通过自噬途径调控肝细胞肝癌索拉菲尼耐药的机制研究研究生：陆帅指导教师：陈云教授学科专业：免疫学学院名称：南京医科大学基础医学院完成时间：二〇一八年四月南京医科

2、大学硕士学位论文目录中文摘要…………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………3前言…………………………………………………………………6正文…………………………………………………………………8材料与方法………………...………………………………8结果…………………………………………………………26讨论……………………………………………………………43总结……………………………………………………………45文献综述……………………………………………………….46参考文献…………………………………

3、……………………56缩略词附录…………………………………………………………65硕士在读期间已发表或待发表论文……………………………67致谢..................................................................................68南京医科大学硕士学位论文CD24分子通过自噬途径调控肝细胞肝癌索拉菲尼耐药的机制研究中文摘要肝细胞肝癌（Hepatocellularcarcinoma,HCC）作为中国最高发的恶性肿瘤之一，排名位于肿瘤相关死亡率的第三位。鉴于其隐匿的起病

4、、迅猛的进展、高恶性程度、侵袭性（尤其肝内转移）、术后高复发率、总体预后不佳等特征，使其对人类产生了不可估量的威胁。在肝癌的综合治疗中，化疗是其中的重要方法之一，而肿瘤多药耐药是严重影响化疗效果及患者生存的主要原因之一。索拉菲尼是一种新型的口服多靶点抗肿瘤药，它是一种双芳基尿素类口服多激酶抑制剂，具有抗肿瘤作用。尽管临床治疗索拉菲尼显示出抗血管生成和抗增殖等效应，为延长晚期肝癌患者生存时间带来了新希望，但肿瘤的反应率还是相当低，总体生存期仅比安慰剂长2-3个月。目前肿瘤对索拉菲尼的耐药机制尚不清楚。因此，了解索拉菲尼的潜在耐药机制对于改善

5、治疗预后具有重要的意义。CD24是一种低分子量高度糖基化的黏附分子。最近研究表明,CD24可高表达于多种恶性肿瘤细胞表面,包括肾癌、肺癌、鼻咽癌、肝细胞癌、膀胱癌、卵巢癌和乳腺癌,且和肿瘤侵袭转移、复发和预后密切相关。在肝细胞肝癌中，CD24被预测为肝癌早期复发的一种生物学标志，同时与肿瘤的恶性程度相关。已有的研究结果表明，CD24的高表达可能与药物耐受相关，例如，不同CD24表达水平的K562白血病细胞对imatinibmesylate药物的敏感性不同。GoldmanA的研究发现，在乳腺癌小鼠模型中CD44与CD24分子在细胞膜脂质体上

6、聚集，通过调控Src家族激酶的激活引起化疗耐受。细胞自噬是一种细胞自我降解的过程，在适应代谢应激、保持基因组完整性及维持内环境稳定方面发挥重要作用。在肿瘤治疗中，凋亡耐受是产生肿瘤耐药的重要机制。细胞自噬可防1南京医科大学硕士学位论文止抗肿瘤药诱导的凋亡，促进肿瘤耐药。目前在肿瘤晚期，自噬被公认为是促进肿瘤细胞耐药的重要因素。那么自噬是否参与CD24介导的索拉菲尼耐药，这也是本研究所要探讨的主要问题。本研究，我们收集了70例肝癌肿瘤组织标本及其癌旁组织，其中有13例是继发性索拉菲尼耐药肿瘤标本。利用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫组织化学方

7、法，检测肝癌患者肿瘤组织、癌旁组织中CD24表达水平，并分析与索拉菲尼耐药的相关性。通过构建肝癌索拉菲尼耐药细胞株，在细胞水平上分析CD24调控索拉菲尼耐药的分子机制。通过过表达或敲低CD24分子，探究其在索拉菲尼耐药过程中所发挥的作用。应用转录组测序技术（RNA-seq）分析CD24高表达耐药细胞株与其对照组间差异表达的基因。应用透射电子显微镜以及RFP-GFP标记的LC3观察细胞内自噬水平。PP2A抑制剂Okadaic以及AKT激动剂SC79用于PP2A/AKT/mTOR信号通路的调控，自噬抑制剂BafilomycinA1及短发夹RN

8、A(shATG5)用于自噬水平的调控。小鼠荷瘤试验用于体内验证CD24调控索拉菲尼耐药的分子机制。我们的研究结果表明，CD24在肝癌肿瘤组织标本以及肝癌索拉菲尼耐药细胞株中高表达，并且CD24