肝癌细胞中wif1的异常表达及其对肝癌侵袭和转移因子timp-3和小窝蛋白1的调节作用

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1、授予单位代码10089学号或申请号15192中国图书分类号R392HebeiMedicalUniversity硕士学位论文学术学位肝癌细胞中WIF1的异常表达及其对肝癌侵袭和转移因子TIMP-3和小窝蛋白1的调节作用作者姓名：宋光导师：钱雪松副教授专业：免疫学二级学院：基础医学院2018年3月目录中文摘要………………………………………………………………………………………………………1英文摘要………………………………………………………………………………………………………3研究论文肝癌细胞中WIF1的异常表达及其对肝癌侵袭和转移因子TIMP-3和

2、小窝蛋白1的调节作用前言………………………………………………………………………………………………………6材料与方法…………………………………………………………………………………………7结果……………………………………………………………………………………………………16附图…………………………………………………………………………………………………18讨论……………………………………………………………………………………………………22结论……………………………………………………………………………………………………24参考文献……………………………

3、………………………………………………………………25综述癌症中的Wnt信号………………………………………………………………………28致谢………………………………………………………………………………………………………42个人简历……………………………………………………………………………………………………43肝癌细胞中WIF1的异常表达及其对肝癌侵袭和转移因子TIMP-3和小窝蛋白1的调节作用摘要目的：在原发性肝细胞或肝内导管细胞中，有90%的恶性肿瘤是肝细胞癌(HCC)，这是在世界上排名第五的常见实体瘤。它有不良的预后，并在临床预防和治疗上很困

4、难。大多数接受肝切除术的肝癌患者在术后复发，导致较高的死亡率。其主要原因是肝癌的侵袭和转移。因此，深入研究肝细胞癌的侵袭转移机制，对于提高肝细胞癌的有效预防和治疗，以及改善肝细胞癌的治疗效果具有重要意义。Wnt基因是Nusse于1982年在乳腺癌小鼠中发现的,Wnt信号通路是多细胞真核生物中调节许多生命活动过程的某种高度保留的信号通路。Wnt抑制因子-1(WIF1)作为Wnt信号通路的分泌性拮抗剂，WIF1蛋白和mRNA在肝癌组织中的表达比邻近组织低，并且整体生存率低与WIF1表达较低有关。通过上调WIF1的表达可以显著抑制宫颈癌细胞和前列腺

5、癌细胞的侵袭和转移能力。我们推测，WIF1可能会通过相关的信号通路影响肝癌细胞的侵袭和转移能力。小窝蛋白1的表达与肝癌的发生发展密切相关。本研究检测了WIF1在肝癌细胞系中的表达。此外，通过转染真核表达载体pcDNA3.1-WIF1，探讨其对肝癌细胞系侵袭转移能力的影响，以及WIF1过度表达对TIMP-3和小窝蛋白-1表达的影响并且探讨这其中可能的机制。方法：1.采用RT-PCR和Westernblot检测了HepG2、Hep3B、Huh7、PLC/PRF/5、SMMC-7721、MHCC97这6个肝细胞癌细胞系和永生化人类肝细胞系THLE-

6、3中WIF1的表达情况。2.利用脂质体2000将真核表达载体pcDNA3.1-WIF1和空白质粒pcDNA3.1转染到肝细胞癌细胞系中。3.通过Transwell穿膜实验检测WIF1对肝癌细胞侵袭能力的影响。4.Westernblot检测了WIF1对肝细胞癌细胞中TIMP-3（基质金属蛋白酶组织抑制因子3）和小窝蛋白-1表达的影响，并检测了对β-catenin（β-1连环蛋白）表达的影响。结果：1.WIF1在肝细胞癌细胞系中的表达低于正常肝细胞系(P<0.01);并且，WIF1在人类高转移性细胞系MHCC-97基本没有表达，而在HepG2和S

7、MMC-7721中适度表达。2.转染真核表达载体pcDNA3.1-WIF1和空白质粒pcDNA3.1到肝癌细胞系,与空白质粒组相比,细胞活力明显降低。3.高表达WIF1的肝癌细胞侵袭能力明显降低。4.高表达WIF1的肝癌细胞TIMP-3和caveolin-1mRNA和蛋白表达的都下降。5.WIF1的表达增加可以导致β-catenin蛋白在HepG2和SMMC-7721细胞中表达下调。结论：1.WIF1在肝癌细胞系中和正常肝细胞比较表达下调或不表达。2.上调WIF1的表达可以显著抑制HepG2与SMMC-7721肝癌细胞系的侵袭和转移。这与TI

8、MP-3表达上调，以及小窝蛋白1表达下调有关，并可能是通过Wnt/β-catenin信号通路实现的。关键词：肝细胞癌，WIF1，肝癌细胞系的侵袭，TIMP-3，小窝