apap与azm联用对大鼠肝脏损伤的机理研究

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1、９９：１０７２０分类号：Ｑ５单位代码密级：公开学号：１５０７１０１００２浹为？ｆＪＡ梦ＳｈａａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ硕士学位论文ＡＰＡＰ与ＡＺＭ联用对大鼠肝脏损伤的机理研究ＳｔｕｄｏｎｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＬｉｖｅｒｉｎｕｒｙｊｙｉｎｄｕｃｅｄｂｃｏ－ａｄｍｙｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＡｃｅｔａｍｉｎｏｈｅｎａｎｄＡｚｉｔｈｒｏｍｃｉｎｐｙ论文作者：景娴指导教师、职称：江海高级实验师张小莺教授学科、专业名称：生物化学与分子生物学

2、研究方向：应用生物化学二〇一八年六月分类号：Q599单位代码：10720密级：公开学号：1507101002硕士学位论文APAP与AZM联用对大鼠肝脏损伤的机理研究StudyonthemechanismofLiverinjuryinducedbyco-administrationofAcetaminophenandAzithromycin论文作者：景娴指导教师、职称：江海高级实验师张小莺教授学科、专业名称：生物化学与分子生物学研究方向：应用生物化学二〇一八年六月摘要对乙酰氨基酚(Acetaminophen,APAP)与阿奇霉素（Az

3、ithromycin,AZM）是临床上广泛使用的两种药物。现两种药物合并使用在临床上较为常见，同时这两种药物合用后对人体产生毒副作用及危害的病例时有报道，且其中大多病例涉及肝脏损伤状况。但这两种药物联合用药后对肝脏损伤的机理及两种药物在肝脏中的代谢状况尚未见系统报道。本文通过同时给予大鼠APAP与AZM两种药物，检测大鼠的生理、生化指标及观察大鼠肝脏组织病理切片，研究这两种药物合用后对大鼠肝脏损伤的机理。另外通过检测肝脏中CYP450代谢酶的变化，对比APAP和AZM的药代动力学参数，探究这两种药物在大鼠肝脏中的代谢状况。为合理使用两种药物提供

4、理论依据，为其他药物的药代动力学研究提供方法参考。本研究主要内容可分为以下两个方面：(1)实验大鼠连续给药三天，APAP与AZM给药量分别为50mg/kg，42mg/kg。通过观察大鼠肝脏的组织病理切片来判断肝脏细胞的形态变化，结果表明：APAP与AZM合用组通过HE染色后观察到肝脏组织结构被破坏，中央静脉淤血明显；通过检测大鼠血清中ALT和AST指标水平及肝脏组织的生化指标代谢酶等来判断大鼠肝脏的损伤机理，结果表明：合用药实验组ALT和AST含量显著升高，抗氧化酶含量均呈显著性下降，但MDA含量增加，说明大鼠肝脏的损伤在一定程度上由氧化应激造

5、成，肝细胞在发生损伤与坏死的同时造成肝功能下降，抗氧化酶GPx、SOD、CAT在肝脏受损后活性明显被抑制，导致其功能减弱，H2O2氧化产物含量明显增多。而在单独给予大鼠药物后，MDA、GPx、SOD、H2O2浓度并无显著性差异变化，同时合用组大鼠体内CYP2E1蛋白酶表达量显著提高，而单独给药组并无这些显著变化；通过实时荧光定量法检测7种相关炎症因子基因的表达情况，结果表明：7种主要炎症因子中，合用组的TNF-α,INF-γ,VCAM-1,CXCL-1与STAT-3表达均显著上升，通过聚类分析可发现，APAP与AZM合用可使炎症因子表达显著增加

6、，而APAP单独给药组与AZM单独给药组之间相似，并无明显变化。上述实验结果表明大鼠肝细胞在两种药物合用后发生氧化应激和炎症反应引起大鼠肝脏损伤，而分别给予相同剂量的APAP或AZM时未造成肝脏的损伤。(2)将实验大鼠分为两大组，第一大组进行单次给药，另一大组进行连续三天给药，APAP与AZM给药量分别为50mg/kg，42mg/kg。最后一次给药5min后给予大鼠5种“鸡i尾酒探针药物”甲苯磺丁脲（5mg/kg），奥美拉唑（20mg/kg），睾酮（10mg/kg），右美沙芬（20mg/kg），氯唑沙宗（20mg/kg），继而在0、0.25、0

7、.5、0.75、1、1.5、2、4、6、12、24、36、48h不同时间点进行采血并处理样品进行检测。通过建立UPLC-MS法同时检测大鼠血浆中5种探针药物，计算出这5种探针药物所对应的CYP450酶的活性变化，结果表明：根据五种探针底物的主要药动学参数可知，APAP组中，其对大鼠体内的CYP2C9和CYP3A4活性均有抑制作用，而对CYP2E1活性具有诱导作用；AZM组中，其对大鼠体内的CYP3A4和CYP2C19活性被抑制，同时CYP2E1活性却被提高；APAP与AZM合用组中，大鼠肝脏中的CYP2C9与CYP3A4酶活性被明显抑制，同时其

8、体内CYP2E1活性被显著诱导。通过建立UPLC-MS/MS法检测大鼠血浆中APAP与AZM的变化，确定出APAP与AZM的药代动力学参数，结果表明：