血水草白屈菜红碱灭螺效果及对钉螺肝脏损伤机理的研究

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1、湖南师范大学硕士学位论文血水草白屈菜红碱灭螺效果及对钉螺肝脏损伤机理的研究姓名：彭飞申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：黄琼瑶201205摘要从血水草根及根茎中提取的血水草总生物碱(砌ecD力c白j彻a力拍aalkaloids，ECA)被课题组证实具有良好的杀螺作用，．白屈菜红碱(c五e．2e珂t矗r工ne，C腿)是EcA的主要成分之一。从EcA中分离单体白屈菜红碱进行杀螺作用及其杀螺机制研究，为血水草作为植物杀螺剂开发利用提供新的实验依据。从血水草粉末中分离CHE。参考WHo规定的“杀螺剂实验室终筛方法”的

2、浸泡法进行杀螺试验。于20℃、25℃、30℃温度下，观察钉螺在25mg／L、12．5mg／L、6．25II培／L、3．125mg／L、1．5625mg／L、0．7813mg／L、0．3906mg／L、0．1953mg／L浓度的CHE溶液中浸泡24、48、72、96h死亡率。设去氯水对照组。通过对数据进行逐步回归计算建立回归数学模型和因素分类区域处理，探讨温度、时间、药物浓度等各种因素对杀螺效果的影响及变化规律。以钉螺肝脏为样本，探讨CHE杀螺机理。设置CHE20mg／L10mg／L、5mg／L水溶液和清水组25℃浸泡

3、钉螺36h，解剖活螺，分离肝脏，提取肝细胞DNA，进行DNA琼脂糖凝胶电泳；将肝组织捣碎，制备肝细胞悬液，用流式细胞术检测CHE溶液是否诱导钉螺肝细胞凋亡。配制5mg／LCHE的水溶液，浸泡钉螺36h，解剖活螺取肝脏，提取CHE处理组和清水对照组钉螺肝脏蛋白质，双向凝胶电泳，ImageMaster2D5．O软件分析图谱，筛选差异蛋白质，并用质谱鉴定。分析CHE致钉螺肝脏蛋白质表达的变化。C腿杀螺研究及对钉螺肝脏损伤机制研究发现：(1)CHE具有良好的杀螺作用。温度20℃、96h、CHE浓度25mg／L钉螺死亡率可达9

4、0％；25℃、C脏浓度0．7813mg／L以上、浸泡96h钉螺死亡全部死亡；温度30℃、CHE浓度O．1953mg／L以上、浸泡72h以上钉螺死亡率均达100％；浓度O．1953mg／L以上浸泡96h，20℃、25℃、30℃温度杀螺效果与对照组差异均具有显著性(尸

5、间差异有显著性(尺O．05)。(3)钉螺肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳图谱结果显示20mg／L、10mg／L、5mg／LCHE溶液处理后均未见典型DNALadder；流式细胞术检测20mg／L、10mg／L、5mg／LCHE溶液处理组和清水对照组的钉螺肝细胞早期凋亡率分别为5．59％、3．42％、5．71％、3．85％，晚期凋亡细胞率分别为1．59％、1．3l％、2．7％、O．7％⋯总凋亡率分别为7．18％、4．73％、8．4l％和4．55％；各CHE溶液处理组和清水对照组两组结果比较近，差异无统计学意义(尸>O．05)

6、，提示上述各浓度CHE溶液浸泡后与清水对照钉螺肝细胞的凋亡无差别。(4)CHE处理组和清水对照组分别平均检测到(405±11)个和(385±8)个蛋白质点，成功鉴定了其中4个蛋白点，分别是肌动蛋Ⅱ～燃嬲白、甘氨酸烯醇样蛋白、0肌动蛋白。这些蛋白在C腿处理后表达均下调。从以上研究结果得出如下结论：(1)CHE具有杀灭钉螺的作用。(2)cHE溶液杀灭钉螺效果受浓度、温度和作用时间影响，cHE浓度增加、环境温度升高及延长浸泡时间，可提高钉螺死亡率。(3)初步证实C肛导致钉螺肝细胞死亡的主要途径不是诱导细胞凋亡。(4)CHE

7、浸泡钉螺后肝脏蛋白质表达发生改变。关键词：血水草；白屈菜红碱；钉螺；杀螺效果；影响因素；肝脏；细胞凋亡；蛋白质组学ⅢABSTRACTThe点'D聊ecD，2c办面咒口，z确口aⅡ【a10ids(ECA)ex眈cted6．omtherootsandtherhizomesof面聊PcD聆c办勿嬲刀砌口Hance，nhaSbeenprovedtobea900dmolluscicideand、ⅣellworthydeVeloping．ToStudythekillingsnailse位Ctof鳓P彪砂砌，砌P(C砸)舶mECA

8、andthe蜘u巧Illecl啪ismofCHEsolutiononliverofthesnailswillprovidenewexperimentaleVidenCesfore)!中loitationof助mPcD咒c办面，z口咒砌口Hanceasaplantmolluscicide．rt、1‘．'●．．1nelmmersemethodwas