槲皮素对非酒精性脂肪肝细胞atp结合框转运子a1

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1、槲皮素对非酒精性脂肪肝细胞ATP结合框转运子A1【摘要】目的：探讨植物化学物质槲皮素(quercetin)对非酒精性脂肪肝(nonalcoholicfattyliver，NAFL)细胞三磷腺苷结合框转运子A1(ABCA1)表达的影响。方法：建立人肝L02细胞脂肪变性模型，以不同浓度的槲皮素处理细胞后，用RTPCR检测ABCA1mRNA的表达。结果：槲皮素可以增加NAFL细胞ABCA1mRNA的表达，且呈剂量依赖性。结论：槲皮素能上调胆固醇转运中的重要蛋白ABCA1的表达。【关键词】槲皮素;非酒精性脂肪肝;人肝L02细胞;三磷腺

2、苷结合框转运子A1　　[Abstract]Objective:TostudytheeffectsofquercetinontheexpressionofATPbindingcassettetransporterA1(ABCA1)mRNAinnonalcoholicfattyliver(NAFL)cells.Methods：HL02cellsfor24htoinduceNAFLmodel,addingquercetinindifferentdosestotheculturemedium.ThelevelofABCA1mRNAiq

3、uantitativeRTPCR.Results：Aftertreatmentetime.Conclusion：QuercetinhadsomeinhibitoryeffectsonNAFLcellsandtheeffectonthesecellsainlyrelatedtotheupregulationofABCA1.　　[Keya公司，RTPCR试剂盒为美国Promega公司产品。总RNA提取试剂盒(Trizol)为上海生物工程公司产品。其余试剂均为国产分析纯。ABCA1和GAPDH引物均由上海生物工程公司合成。　　1.2

4、方法　　1.2.1人肝L02细胞培养及NAFL模型的建立人肝L02细胞培养接种于50ml培养瓶中，将含体积分数10%的灭活胎牛血清、100U/ml氨苄西林和100μg/ml链霉素的RPMI1640完全培养基，置37℃、体积分数5%CO2、饱和湿度的孵箱内培养，每48h换液1次，在细胞达1×109时用完全培养基重新悬浮，并以1∶3的比例传代，取对数生长期细胞进行实验。实验前用无血清的RPMI1640培养24h，使细胞周期同步化。参照范建高等[2]方法，在更换新鲜培养液后加入50%的胎牛血清，继续培养24h，即形成非酒精性肝脂肪

5、变性模型(镜像比较造模前后细胞内的脂滴变化，组织学上低倍镜下每单位面积见1/3以上的肝细胞脂肪变性和脂肪储积，无其他明显组织学改变)。加入槲皮素共同孵育24h。　　1.2.2实验分组实验分为正常肝细胞组(培养24h+24h)，NAFL模型组(造模24h+24h)、小剂量组(造模24h后，加槲皮素使其终浓度为10μmol/L，共同孵育24h)、中剂量组(造模24h后，加槲皮素使其终浓度为20μmol/L，共同孵育24h)、大剂量组(造模24h后，加槲皮素使其终浓度分别为40，80μmol/L，共同孵育24h)、普罗布考对照组(造模24

6、h后，加普罗布考使其终浓度为10μmol/L，共同孵育24h)。实验重复5次，结果取平均值。　　1.2.3ABCA1mRNA的RTPCR检测收集培养的细胞，按Trizol试剂的说明书，分别提取总RNA，用紫外分光光度计定量后，调整RNA的浓度为0.2g/L。RTPCR的反应体系为：两对引物各1.0μl，10×缓冲液5μl，25mmol/LMgSO41μl，10mmol/LdNTP混合物0.5μl，DNA聚合酶0.5ml及逆转录酶0.5μl，用去离子水补至25μl。反应条件为：48℃45min,94℃3min;94℃90s,58℃

7、1min，72℃1min，共28个循环后，再于72℃延伸7min。取RTPCR产物5μl，在10g/L含溴乙啶的琼脂糖凝胶中进行电泳分析，在紫外灯下观察结果。RTPCR引物序列参照文献设计如下：ABCA1上游引物5′GGGAGGCTCCCGGAGTT3′，下游引物5′GTATAAAAGAAGCCTCCGAGCATC3′，PCR扩增产物长度为1352bp;GAPDH引物序列设计如下:上游引物5′TCACCATCTTCCAGGAGCGAG3′，下游引物5′TGTCGCTGTTGAAGTCAGAG3′,PCR扩增产物长度为69

8、7bp。　　1.2.4统计学分析实验数据以均数±标准差(±s)表示，多组数据的比较采用单因素方差分析，组间两两比较用q检验，P<0.05为差异有统计学意义。全部资料均用SPSS12.0统计软件进行分析。　　2结果　　琼脂糖凝胶电