槲皮素对人卵巢癌ho

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1、槲皮素对人卵巢癌HO【关键词】槲皮素卵巢癌增殖凋亡　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofquercetinonproliferationandapoptosisofHO-8910ovariancancercellinvitro.MethodsTheproliferationofcellsethod.Cellcycleandapoptoticpercentageetry(FCM).Theexpressionofp53andBcl-2es.Thefloetryshoaybethemechanismofapoptosisofova

2、riancancerbyquercetin.Keya公司），25℃溶于DMSO中；Bcl-2抗体(FITC)及p53抗体(FITC)及同型对照为pharminga公司；胰蛋白酶、RPMI-1640(华美生物公司)；MTT及二甲亚砜DMSO（sigma公司）。　　1.2方法　　1.2.1细胞培养　　人卵巢癌HO-8910细胞株，培养基为RPMI-1640内含10%灭活胎牛血清、37℃、5%二氧化碳的饱和湿度培养传代。　　1.2.2实验分组　　共分5组：实验组：加入槲皮素，终浓度分别为10.0μmol/L，20.0μmol/L,40.0μmol/L及80.0μmol

3、/L组；对照组：加入等量的同型IgG1单克隆抗体。(每组设6个复孔)　　1.3实验指标的检测　　1.3.1MTT试验取对数生长期的HO-8910细胞，制成浓度为1×105个/mL的单细胞悬液，接种于96孔培养板中，每孔200μL，过夜贴壁后；实验组加入10.0μmol/L，20.0μmol/L,40.0μmol/L及80.0μmol/L的槲皮素，对照组加等量的同型IgG1单克隆抗体。每组设6个复孔，继续培养24、48h后加入MTT(5mg/mL)20μL/孔，4h后吸净上清液，加入DMSO20μL/孔，震荡10min，用酶标记光仪在波长为560nm时测定每孔的吸

4、光度(A)值，计算不同浓度抗体对细胞增殖的抑制率［抑制率=(对照组A均值-实验组的A均值)/对照组A均值］［2］。　　1.3.2流式细胞仪检测细胞周期取对数生长期的HO-8910细胞，制成浓度为1×106个/mL的单细胞悬液，接种于6孔培养板中，按上述浓度培养48h后，收集细胞，PBS洗涤，制成单细胞悬液，用70%的冰乙醇4℃固定12h，用含核糖核酸酶及碘化丙锭的染液染30min，上流式细胞仪进行检测。　　1.3.3流式细胞仪检测细胞凋亡率取对数生长期的HO-8910细胞，制成浓度为1×106个/mL的单细胞悬液，接种于6孔培养板中，按上述浓度培养48h后，收集

5、细胞，用AnnexinV-FITC/PI双标记染色后做流式细胞仪双色分析。　　1.3.4流式细胞仪检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和p53蛋白表达取对数生长期的HO-8910细胞，制成浓度为1×106个/mL的单细胞悬液，接种于6孔培养板中，按上述浓度培养48h后，收集细胞，70%的冰乙醇4℃固定过夜，洗去乙醇，取1×106个细胞加10mLFITC标记的抗Bcl-2和p53抗体及同型IgG1单克隆抗体，在4℃暗处孵育30min洗去多余单抗。上流式细胞仪获取信息（本实验重复4次）。实验结果显示：槲皮素对HO-8910细胞的生长具有明显的抑制作用,实验范围内最大抑制率

6、达67.01%，且抑制作用随药物浓度增加、作用时间延长而增强，呈现剂量、时间依赖性作用,经统计学检验差异具有显著性意义(P<0.01，见表1)。表1实验组和对照组卵巢癌细胞内的吸光度值和增殖抑制率(略)注：*每个浓度组与前一浓度组比较P<0.01；△每个时间段与前一时间段比较P<0.01　　2.2槲皮素对卵巢癌细胞周期分布和凋亡率的影响　　不同浓度槲皮素作用卵巢癌细胞48h后，与对照组相比，细胞周期分布、凋亡率均发生改变，即G1/G0期细胞比例数上升，S期和G2/M期下降，细胞凋亡率上升，均有显著差异(P<0.05)，且与槲皮素浓度之间具

7、有剂量依赖性(P<0.05，见表2)。表2槲皮素对卵巢癌细胞周期分布和凋亡率的影响(略)注：*每个浓度组与前一浓度组比较P<0.01　　2.3槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响不同浓度槲皮素作用卵巢癌细胞48h后，与对照组相比，促凋亡蛋白p53表达上调，而凋亡抑制蛋白Bcl-2表达下降，均有显著差异(P<0.01)，且与槲皮素浓度之间具有剂量依赖性(P<0.01，见表3)。表3槲皮素对凋亡相关蛋白Bcl-2、p53表达的影响(略)注：*每个浓度组与前一浓度组比较P<0.013讨论槲皮素是一种具有多种生物学活性的黄酮类化

8、合物，广泛分布于被子植物