酸枣仁黄酮跨膜转运及其磷脂复合物自微乳制剂研究

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1、类号：学校代码：１００６９１１５１密级：２００２０：学号？表津］孝ＴＩＡＮＪＩＮＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＯＦＣＯＭＭＥＲＣＥ硕士学位论文酸枣仁黄酮跨膜转运及其磷脂复合物自微乳制剂研究ＳｔｕｄｙｏｎＴｒａｎｓｏｒｔａｔｉｏｎＣｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＦｌａｖｏｎｏｉｄｓｐ－ｍｆｒｏｍＺｚｈｉＳｎｏｓａｅＳｅｍｅｎａｎｄｉｔｓＳｅｌｆｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎｉｉｐｐｉｏｆＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄＣｏｍｐｌｅｘ研究生：宋盼盼专业名称：食品科学指导教师：解军波教授２０１８年６月分类号：学校代码：10

2、069密级：研究生学号：120150201酸枣仁黄酮跨膜转运及其磷脂复合物自微乳制剂研究StudyonTransportationCharacteristicsofFlavonoidsfromZiziphiSpinosaeSemenanditsSelf-microemulsionofPhospholipidComplex研究生姓名：宋盼盼专业名称：食品科学指导教师姓名：解军波教授论文提交日期：2018年6月学位授予单位：天津商业大学摘要酸枣仁黄酮是传统药食同源物质酸枣仁中含量较高的有效成分之一，具有多种药理作用，如镇静催眠、抗抑郁、抗焦虑以及抗氧化等。酸枣仁黄酮的肠道吸收特征对评

3、价其活性和功效至关重要。研究酸枣仁黄酮的肠道吸收特征不仅可以指导人们为其选择适宜的剂型，促进吸收与利用，还可以降低其作为功能性食品研发时的投资风险。Caco-2细胞单层模型的结构和功能与人体的小肠上皮细胞极为相似，因此该模型已被广泛地应用于体外生物活性分子肠吸收的研究。酸枣仁黄酮为黄酮碳苷类化合物，水溶性较好，而脂溶性较差，生物利用度低。因此为其选择合适的剂型，提高膜渗透性尤为重要。本论文首先采用摇瓶法测定异牡荆素、当药素、异牡荆素-2’’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、斯皮诺素、6’’’-对香豆酰斯皮诺素、6’’’-阿魏酰斯皮诺素六种酸枣仁黄酮的油水分配系数，通过计算LogP值考察

4、酸枣仁黄酮的脂溶性和水溶性，从而预测其在肠道内的吸收。随后采用经典的Caco-2细胞模型研究酸枣仁黄酮的肠道吸收特征和机制，同时考察影响化合物肠吸收的因素，从而预测酸枣仁黄酮的体内肠吸收性能。最后根据斯皮诺素结构特征将其制备成磷脂复合物自微乳制剂，并通过形态学观察、粒度测定、体外分散性考察、体外肠吸收特征研究和口服生物利用度测定试验对其进行质量评价。主要研究成果如下：(1)油水分配系数实验结果表明六种酸枣仁黄酮的脂溶性较小，预测其膜渗透性较差，口服生物利用度较低。酸枣仁黄酮在弱酸性pH条件下脂溶性较好，推测其在十二指肠等偏酸性环境中吸收较好。(2)通过细胞形态观察、跨膜电阻值(T

5、EER)测定和荧光黄渗透实验评价构建的Caco-2细胞单层模型的完整性，当细胞汇集到完整致密的单层时进行转运实验。双向转运实验结果表明六种酸枣仁黄酮属于肠吸收较好的功能性成分，吸收强弱顺序为：6’’’-阿魏酰斯皮诺素>6’’’-对香豆酰斯皮诺素>异牡荆素-2’’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷>斯皮诺素>异牡荆素>当药素。(3)肠吸收影响因素实验结果表明中性(pH=7.4)和37°C的环境有利于斯皮诺素和6’’’-阿魏酰斯皮诺素的跨膜转运。肠吸收机制研究结果表明，斯皮诺素和6’’’-阿魏酰斯皮诺素均由能量依赖的主动转运方式介导。其中，单羧酸转运蛋白(MCT)和有机阴离子转运蛋白(OAT

6、P)参与斯皮诺素的吸收，而6’’’-阿魏酰斯皮诺素仅有单羧酸转运蛋白(MCT)的参与。除载体蛋白介导的主动转运外，斯皮诺素的吸收过程还存在胞旁转运途径。外排机制研究结果表明P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药蛋白(MRP)均介导斯皮诺素和6’’’-阿魏酰斯皮诺素的外排过程，此外，斯皮诺素的外排还有乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的参与。(4)采用溶剂挥发法制备斯皮诺素磷脂复合物(SPI-PLC)，结果显示以丙酮作反应溶剂，药脂比为1:14.5，搅拌速度、反应温度和反应时间分别为850r/min、40°C和2.8h时，复合率可达(91.01±0.79)%；UV和IR分析表明斯皮诺素与磷脂形成

7、了复合物，且SPI-PLC的脂溶性明显增强。(5)在SPI-PLC的基础上，采用自微乳技术制备稳定性更好的斯皮诺素磷脂复合物自微乳(SPI-PLC-SMEDDS)。结果表明，制备的SPI-PLC-SMEDDS粒径小，分散均匀，体外释放度高，肠吸收和生物利用度显著提高，具有良好的应用前景。关键词：酸枣仁黄酮；油水分配系数；Caco-2细胞单层模型；跨膜转运；斯皮诺素磷脂复合物自微乳ABSTRACTFlavonoids,derivedfromtheseedofZiziphousjuj