神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的

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1、神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的【摘要】目的观察神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响。方法建立脊髓损伤动物模型，脊髓内注射神经干细胞，采用改良Gale联合评分法评价神经功能，通过HE染色及尼氏体染色观察脊髓灰白质及神经元的组织学改变。结果脊髓损伤神经干细胞移植组大鼠感觉、运动功能恢复明显(P<0.05);灰、白质中出现小片状出血，神经元肿胀、破裂、溶解，尼氏小体减少程度较脊髓损伤组轻，损伤坏死区胶质细胞较脊髓损伤组增多(P<0.05)。结论使用神经干细胞移植能减轻神经细胞

2、坏死程度，减轻脊髓损伤，并使损伤坏死区胶质细胞增多，促进脊髓损伤的修复，对脊髓损伤大鼠感觉、运动功能的恢复有促进作用。【关键词】神经元，干细胞;脊髓损伤;组织学;疾病模型，动物脊髓损伤(spinalcordinjury,SCI)是临床上常见的疾病，致残率高，治疗效果不理想，多以不全瘫或全瘫为结局，严重影响患者的生活质量。因此SCI后功能恢复的研究一直是神经科学研究的难点和热点。近年来，神经干细胞(neuralstemcells,NSC)的移植给SCI后治疗带来新的希望。NSC具有多潜能、自我复制和更新、未分化等特征。

3、本研究通过在损伤脊髓的局部移植NSC，观察行为学和组织学方面的变化，初步探讨NSC对损伤脊髓局部神经细胞的影响及其表达功能的调节。　　1动物与方法　　1.1动物与仪器试剂SpragueDapus公司);立体定位仪(江湾C型，上海第二军医大学);微量注射器(1μL，美国Sigma公司);组织切片机(Leica2135型，德国)。脱毛剂：8%硫化钠水溶液;10%甲醛水溶液;1%伊红水溶液;10%苏木素;缓冲亚甲蓝染液;0.2%醋酸盐缓冲液;4%钼酸铵液;NSC(由福建医科大学分子医学211工程实验室提供)漂洗3次，含量

4、为105μL-1。　　1.2方法　　1.2.1分组大鼠随机分3组：(1)对照组10只，仅暴露硬脊膜。(2)SCI组30只，用3%戊巴比妥钠(40mg/kg)腹腔注射麻醉后，俯卧位固定，显露T9T11棘突，咬除T10棘突及椎板，暴露硬脊膜，应用Allen打击法致SCI，打击势能50gcm，损伤部位注射等量生理盐水，并于SCI后2、5、12d各取10只大鼠处死，取SCI部位上下各4mm脊髓，行HE染色和神经尼氏体染色。(3)NSC移植组30只，于SCI后即刻注射NSC。注射时用微量注射器吸取NSC1μL，应用立体定位

5、仪于T10平面脊髓后动脉旁开0.5mm注射，深度1mm，5min内注射完毕，留针3～5min，并于注射NSC后2、5、12d各取10只大鼠处死取材，取材范围及染色方法同SCI组。　　1.2.2行为学及组织学观察神经功能评价标准采用改良Gale联合评分法(改良CBS法)[1]。检测项目是：开放空间运动能力、脚趾伸展、触地反应、回缩反射、矫正反射、斜板试验及游泳试验。评分以正常为100分，后肢全瘫为0分。常规HE染色，光镜观察脊髓出血、水肿等;神经尼氏体采用Pischingert氏亚甲蓝染色法，光镜观察神经细胞肿胀、变

6、性、坏死及尼氏小体变化等。　　1.3统计学处理数据以x±s表示，采用SPSS10.0软件进行统计学分析，组间比较采用单因素方差分析。　　2结果　　2.1行为学观察结果NSC移植组大鼠感觉、运动功能恢复明显，与SCI组及对照组比较，差别有统计学意义(P<0.05，表1)。　　2.2SCI前后及NSC移植后组织学变化SCI组于SCI后2d，脊髓灰、白质中出现片状出血，神经元肿胀、破裂、溶解，尼氏小体减少甚至消失，且随距损伤处距离的延长而逐渐减轻;于SCI后5d，损伤坏死区有胶质细胞增生，伤后12d增生更加明显(图1

7、)。表1大鼠改良CBS评分与脊髓损伤组比较，△：P<0.05;与对照组比较，☆：P<0.05.NSC移植组损伤后2d，灰、白质中出现小片状出血，神经元肿胀、破裂、溶解，尼氏小体减少程度较SCI组轻;损伤后5d及12d，损伤坏死区胶质细胞均较SCI组增多(图2)。　　3讨论　　SCI是一种常见而严重的临床疾患。我国发病率约每年6.7人/百万人，以中青年胸腰段损伤最多。常导致患者损伤平面以下感觉、运动功能减退　　A～D：脊髓损伤后2d(A：×40;B～D：×400);灰、白质中出现片状出血，神经元肿胀、破裂、

8、溶解，尼氏小体减少甚至消失，且随距损伤处距离的延长而逐渐减轻;E：脊髓损伤后5d(×100)，损伤坏死区有胶质细胞增生;F～G：脊髓损伤后12d组(F：×100;G：×400);损伤坏死区有胶质细胞增生更加明显.A、B、C、E、F：HE染色;D、G：Pischingert氏亚甲蓝染色.　　图1脊髓损伤组的组织学变化　　Fig1Histolog