小鼠il12基因转染对人卵巢癌skov3细胞的生

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1、小鼠IL12基因转染对人卵巢癌Skov3细胞的生【关键词】基因转染　EffectofmouseIL12genetransfectiononthegroidouseIL12genetransfectedintoSkov3cells,anovariancancerSkov3cellsouseIL12genebylipofect.TheexpressionsofIL12andINFγorehigherthanthatincontrolgroup(13-17ng/L,P＜0.05).OvariancancercellscouldproduceINFγundertheinfluenceof

2、spleencells,andthehighestlevel(173±18)ng/Lemerged24haftertransfection,untransfectedgroup(P＜0.05).Skov3ovariancancercellsproliferationmunochemistryrevealedthatthecancercellscouldproduceIL12aftertransfection,andthelattercouldrestraintheproliferationofSkov3ovariancancercells.CONCLUSION:TheIL12ge

3、nescouldbetransfectedintoSkov3ovariancancercellstoproductIL12andrelativecellfactors,acellsofovary.【Keys;geherapy【摘要】目的：观察含小鼠IL12全长基因的质粒转染到Skov3人卵巢癌细胞中，在脾细胞存在的情况下对肿瘤细胞的影响及相关细胞因子的表达.方法：脂质体转染技术将基因转染至Skov3人卵巢癌细胞中，ELISA方法检测IL12及INFγ的表达，MTT方法检测对Skov3卵巢癌细胞增殖的影响.结果：转染后48h检测到IL12的高表达，约(473±38)ng/L；而未转

4、染组约13~17ng/L，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）.在脾细胞作用下产生INFγ，以作用后24h表达量高，约(173±18)ng/L，较未转染组高，比较有统计学意义(P＜0.05).转染后癌细胞免疫组化可见IL12表达，在脾细胞的作用下，IL12对Skov3卵巢癌细胞有抑制其增殖的作用(P＜0.05).结论：可以将IL12基因转染至Skov3人卵巢癌细胞中并表达IL12，脾细胞检测其活性并有相应的细胞因子产生，对Skov3细胞有抑制其增殖作用，从而杀伤卵巢癌细胞，具有抗肿瘤作用.【关键词】白细胞介素12；卵巢肿瘤；基因治疗0引言肿瘤生物学治疗的许多细胞因子中IL12

5、是最有效的［1］.它具有明显的抗原发和转移瘤的作用，且毒性远比IL2低，成为广大学者研究的热点之一.卵巢恶性肿瘤在盆腔内生长，易于转移而广泛播散，复发率、转移率均较高.杨红等［2］将β葡萄糖醛酸苷酶基因转入卵巢癌细胞以探索卵巢癌临床基因治疗.我们将含有小鼠IL12全长基因的质粒转染至Skov3人卵巢癌细胞中，观察其表达情况及其相关细胞因子的表达，评价其抗肿瘤效果，探讨临床应用的可行性.1材料和方法1.1材料人卵巢浆液性乳头状囊腺癌Skov3细胞株（美国MemorialSloanKatteringCancerCenter）用含100mL/L小牛血清的RPMI1640(Gibco公司

6、产品)培养液，在37℃，50mL/LCO2条件下培养，隔天换液，细胞长满单层后用2.5g/L胰蛋白酶消化传代.含有全长小鼠IL12质粒［PCAGGSIL12(7.1kb)［PCAGGSIL12P35TRESIL12P40］的大肠杆菌（哈尔滨医科大学微生物教研室）；成年KM小鼠2只，购于黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心；脂质体转染试剂盒Roche公司产品.1.2方法将已经转化质粒［PCAGGSIL12(7.1kb)［PCAGGSIL12P35TRESIL12P40］的大肠杆菌菌株加入LB培养基5mL中，置于37℃摇床中24h，传代过夜，见培养基较浑浊后进行提取，-20℃保存并取25μ

7、L质粒溶液加入蒸馏水1mL中，分光光度计260，280nm下观察A值，得到质粒的浓度和纯度.DNA浓度公式：c(mg/L)=A260nm/0.20;DNA纯度公式：A260nm/A280nm.将Skov3细胞制成单细胞悬液，以1×106接种于6孔板中.贴壁后，用不含血清和抗生素的RPMI1640培养液洗板3次，将含有质粒和脂质体的混合液（25μL+50μL=75μL）轻轻混匀放置10min后将混合液加入6孔板中，设无小鼠IL12基因的空白质粒为对照.置37℃,50mL/LCO2孵