小鼠il12基因转染对人卵巢癌skov3细胞的生长及细胞因子的表达论文

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1、小鼠IL12基因转染对人卵巢癌Skov3细胞的生长及细胞因子的表达论文【关键词】基因转染EffectofmouseIL12genetransfectiononthegroidouseIL12genetransfectedintoSkov3cells,anovariancancerSkov3cellsouseIL12genebylipofect.TheexpressionsofIL12andINFγorehigherthanthatincontrolgroup(13-17ng/L,P＜0.05).OvariancancercellscouldproduceI

2、NFγundertheinfluenceofspleencells,andthehighestlevel(173±18)ng/Lemerged24haftertransfection,untransfectedgroup(P＜0.05).Skov3ovariancancercellsproliferationmunochemistryrevealedthatthecancercellscouldproduceIL12aftertransfection,andthelattercouldrestraintheproliferationofSkov3ovari

3、ancancercells.CONCLUSION:TheIL12genescouldbetransfectedintoSkov3ovariancancercellstoproductIL12andrelativecellfactors,acellsofovary.【Keys;geherapy【摘要】目的：观察含小鼠IL12全长基因的质粒转染到Skov3人卵巢癌细胞中，在脾细胞存在的情况下对肿瘤细胞的影响及相关细胞因子的表达.方法：脂质体转染技术将基因转染至Skov3人卵巢癌细胞中，ELISA方法检测IL12及INFγ的表达，MTT方法检测对Skov3卵巢癌

4、细胞增殖的影响.结果：转染后48h检测到IL12的高表达，约(473±38)ng/L；而未转染组约13~17ng/L，两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）.在脾细胞作用下产生INFγ，以作用后24h表达量高，约(173±18)ng/L.freelorialSloanKatteringCancerCenter）用含100mL/L小牛血清的RPMI1640(Gibco公司产品)培养液，在37℃，50mL/LCO2条件下培养，隔天换液，细胞长满单层后用2.5g/L胰蛋白酶消化传代.含有全长小鼠IL12质粒［PCAGGSIL12(7.1kb)［PCAGGSIL

5、12P35TRESIL12P40］的大肠杆菌（哈尔滨医科大学微生物教研室）；成年KM小鼠2只，购于黑龙江省肿瘤研究所实验动物中心；脂质体转染试剂盒Roche公司产品.1.2方法将已经转化质粒［PCAGGSIL12(7.1kb)［PCAGGSIL12P35TRESIL12P40］的大肠杆菌菌株加入LB培养基5mL中，置于37℃摇床中24h，传代过夜，见培养基较浑浊后进行提取，-20℃保存并取25μL质粒溶液加入蒸馏水1mL中，分光光度计260，280nm下观察A值，得到质粒的浓度和纯度.DNA浓度公式：c(mg/L)=A260nm/0.20;DNA纯度公式：

6、A260nm/A280nm.将Skov3细胞制成单细胞悬液，以1×106接种于6孔板中.贴壁后，用不含血清和抗生素的RPMI1640培养液洗板3次，将含有质粒和脂质体的混合液（25μL+50μL=75μL）轻轻混匀放置10min后将混合液加入6孔板中，设无小鼠IL12基因的空白质粒为对照.置37℃,50mL/LCO2孵箱中培养，6h后更换含100mL/L胎牛血清的培养液，于孵箱中继续培养进行转染.收获不同时间（24，48，72h）的培养上清按小鼠IL12ELISA试剂盒说明建立标准曲线，于转染后24，48，60h检测上清IL12表达水平.以未转染的Skov

7、3为对照.取成年KM小鼠脾脏，制备脾细胞悬液，加RPMI1640培养液3mL混匀培养，稀释10倍后细胞记数器记数：C（个/mL）=(A+B+C+D)/4×10×104.吸取转染后48h的上清，加入脾细胞悬液中（约含1.0×106脾细胞），培养0，24，48h，分别检测INFγ表达；收集转染后的Skov3卵巢癌细胞，将脾细胞悬液（约含1.0×106脾细胞）加入其中，共同培养24，48h后，收集上清，检测INFγ表达.以未转染的Skov3A值为对照MTT法检测Skov3卵巢癌细胞抑制率=［（A对照组-A实验组）/A对照组］×100%统计学处理：全部数据经统计软

8、件SPSS10.1处理，组间比较用方差分析，P0.05为有统计学意