atra对动脉内皮损伤后平滑肌细胞cdks表达影

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1、atRA对动脉内皮损伤后平滑肌细胞CDKs表达影【摘要】目的探讨全反式维甲酸（atRA）对受损大鼠主动脉内皮平滑肌细胞周期素依赖性激酶(CDKs)表达的影响。方法77只大鼠随机分为假手术组、损伤组、atRA组，分别于术后2、7、14d取实验动脉段，测定内膜、中膜平滑肌细胞CDK2、CDK4的表达水平。结果损伤组CDK2、CDK4均于术后2d在中膜表达，随后表达渐少，损伤后7d，在内膜有表达，14d内膜表达呈强阳性，并可见向管腔表面聚集现象；atRA组CDK2阳性表达指数较损伤组显著下降(t=4.97～17.86，P<0.01),CDK4阳性表达指数亦显著下降(t=5.64～2

2、0.05，P<0.01)。结论atRA可能通过抑制CDK2、CDK4的过表达而抑制细胞周期进程，从而抑制内膜增生。【关键词】维甲酸创伤和损伤动脉肌细胞平滑肌细胞周期蛋白质依赖激酶类［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectsofalltransretinoicacid(atRA)ontheexpressionofcyclindependentkinase（CDKs）aftervascularinjury.MethodsTheratslydividedintoshamoperatedgroup,injurygroup,andatRAg

3、roup.TheaortictissuesmunohistochemistryforCDK2andCDK4edatdifferenttimes.ResultsImmunohistochemicalanalysisrevealedexpressionofbothCDK2andCDK4ediaofinjuredthoracicarteriesatday2.Atday7,expressionofCDK2andCDK4declinedtobasallevelsinthemediabutbothallesion.Byday14,inentintimallesionformed,CDK2and

4、CDK4inalsurface.LessCDK2(t=4.97-17.86，P＜0.01)andlessCDK4(t=5.64-20.05，P＜0.01)immunostainingayinhibittheVSMCcellcyclebyreducingtheoverexpressionofCDK2andCDK4toinhibitintimalhyperplasia.［KEYC）增生并向内膜迁移，支架内再狭窄率可达15%～20%左右，影响PCI术后远期疗效。刺激VSMC增生的分子机制和信号传导途径是呈网络状分布的，仅抑制某一种因子并不能有效抑制VSMC增生，寻求VSMC增生最后的共

5、同途径，才是有效抑制VSMC增生的最佳途径，细胞周期可能就是这样一种最终的共同的途径。全反式维甲酸（atRA）具有影响细胞生长、凋亡、分化与移行等广泛的生物学作用,因此亦可能对某些血管疾病有治疗价值。本文通过分析atRA对球囊损伤大鼠胸主动脉后平滑肌细胞的细胞周期素依赖性激酶(CDKs)表达的影响，探讨atRA用于防治PCI术后再狭窄的机制。1材料与方法1.1材料atRA为上海第六制药厂产品；CDK2单克隆抗体（工作液）为美国SantaCruz公司产品；CDK4单克隆抗体（工作液）、免疫组化通用SP试剂盒为美国ZYMED公司产品；VIDAS21图像分析系统为德国蔡氏公司产品；自制2

6、F球囊导管。g·kg-1·d-1）灌胃。1.2.2动物模型制作参照刘乃奎等［1］的方法，将大鼠用6g/L戊巴比妥钠（5mL/kg腹腔内注射）麻醉后，经左颈总动脉插入2F球囊导管至腹主动脉处，注入0.1mL生理盐水扩张球囊，回拉至颈总动脉分叉处，反复3次，将导管旋转180°，再反复回拉3次，拔出导管，结扎缝合切口，常规饲养。术前1d及术后3d每只大鼠给予青霉素10万单位腹腔内注射预防感染。1.2.3标本制备将大鼠处死后，快速摘取胸主动脉，连续剪取3段2.5mm长的血管，去除外膜内疏松结缔组织，置于中性甲醛缓冲液固定24h，经石蜡包埋，5μm厚连续切片，每段血管标本取3张切片，采用SP

7、法，严格按照试剂盒操作步骤分别进行CDK2、CDK4免疫组化染色。光镜下观察免疫组化切片，胞核呈棕色为阳性。每只大鼠每个指标观察9张切片，VIDAS21图像分析系统随机测量每张切片中10个视野(400倍)阳性细胞的平均吸光度及平均阳性细胞百分率，取其均数，用两者乘积再乘以100作为阳性表达指数，来表示蛋白质的表达水平。1.2.4统计学分析数据以±s表示，采用SPSS11.0统计软件分析。组间比较采用t检验。2结果假手术组CDK2、CDK4表达均呈阴性反应。损伤组CDK