atra对动脉内皮损伤后平滑肌细胞cdks表达影响

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1、atRA对动脉内皮损伤后平滑肌细胞CDKs表达影响【关键词】维甲酸创伤和损伤动脉肌细胞平滑肌细胞周期蛋白质依赖激酶类［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectsofalltransretinoicacid(atRA)ontheexpressionofcyclindependentkinase（CDKs）aftervascularinjury.MethodsTheratslydividedintoshamoperatedgroup,injurygroup,andatRAgroup.Theaortictissuesmunohistochemistryfo

2、rCDK2andCDK4edatdifferenttimes.ResultsImmunohistochemicalanalysisrevealedexpressionofbothCDK2andCDK4ediaofinjuredthoracicarteriesatday2.Atday7,expressionofCDK2andCDK4declinedtobasallevelsinthemediabutbothallesion.Byday14,inentintimallesionformed,CDK2andCDK4inalsurface.LessCDK2(t=4.97-17.86，P＜0.01)an

3、dlessCDK4(t=5.64-20.05，P＜0.01)immunostainingayinhibittheVSMCcellcyclebyreducingtheoverexpressionofCDK2andCDK4toinhibitintimalhyperplasia.［KEYC）增生并向内膜迁移，支架内再狭窄率可达15%～20%左右，影响PCI术后远期疗效。刺激VSMC增生的分子机制和信号传导途径是呈网络状分布的，仅抑制某一种因子并不能有效抑制VSMC增生，寻求VSMC增生最后的共同途径，才是有效抑制VSMC增生的最佳途径，细胞周期可能就是这样一种最终的共同的途径。全反式维甲酸（atR

4、A）具有影响细胞生长、凋亡、分化与移行等广泛的生物学作用,因此亦可能对某些血管疾病有治疗价值。本文通过分析atRA对球囊损伤大鼠胸主动脉后平滑肌细胞的细胞周期素依赖性激酶(CDKs)表达的影响，探讨atRA用于防治PCI术后再狭窄的机制。1材料与方法1.1材料atRA为上海第六制药厂产品；CDK2单克隆抗体（工作液）为美国SantaCruz公司产品；CDK4单克隆抗体（工作液）、免疫组化通用SP试剂盒为美国ZYMED公司产品；VIDAS21图像分析系统为德国蔡氏公司产品；自制2F球囊导管。C向内膜的迁移、增生是再狭窄的主要病理机制［2,3］。抑制平滑肌细胞增生和向内膜迁移是预防血管成形术后再狭

5、窄的重要手段。CDKs是一种蛋白激酶家族，是细胞周期调节重要分子，它们通过磷酸化脱磷酸化调节一系列靶分子的活性，最终导致DNA的复制和有丝分裂。研究发现，atRA能维持并诱导VSMC处于较高水平的分化状态，抑制VSMC迁移和增殖［4］。CDKcyclin复合物的周期性聚集、激活和解聚可驱动细胞周期运转，CDK是复合物的催化亚基，而cyclin是调节亚基。cyclinECDK2、cyclinACDK2和cyclinDCDK4共同参与G1期和S期的视网膜母细胞瘤基因(Rb)磷酸化，使E2F释放，增加转录RNA的速度，促进细胞由G1期向S期过渡［5］。KOSOKA等［6］采用细胞培养研究发

6、现,atRA对cyclinE、cyclinD3、CDK4、CDK6、CDK2等多种基因有抑制作用，从而抑制细胞周期进程。刘国霞等［7］应用免疫组化和电子显微镜观察的方法研究atRA对原代培养的人腹主动脉VSMC增殖的影响，发现atRA使VSMC的增长速度减慢，经atRA处理的细胞中cyclinD1、CDK4的表达分别降低了39%和38%，cmyc基因的表达水平降低了43.6%。本实验结果显示，CDK2、CDK4在正常动脉壁血管组织中表达量甚微或无；球囊损伤术后2d其均呈阳性反应，阳性细胞在中膜散在表达；术后7d新生内膜形成，均在内膜表达，中膜则少或无表达；术后14d随内膜进一步增厚，表达局限

7、于内膜，均呈强阳性，且有向管腔表面聚集的趋势，这与ORISHITA等［9］合成了CDK2的反义寡核苷酸，以病毒HVU脂质体为介导，转染到大鼠损伤颈动脉，转染2周即发现内膜增生被显著抑制（抑制率达60%）。SUZUKI等［10］亦证实HVJ脂质体介导的CDK2反义寡核苷酸对移植冠状动脉内膜增生有抑制作用。TAKAGI［11］发现，腺病毒诱导的CDK抑制物p57kip2的过度表达可抑制血管平滑肌细