ca 125阴性卵巢上皮性恶性肿瘤患者血清相关蛋

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1、CA125阴性卵巢上皮性恶性肿瘤患者血清相关蛋【摘要】目的研究CA125阴性卵巢上皮性恶性肿瘤患者血清相关蛋白检测及其意义。方法取CA125阴性卵巢上皮性恶性肿瘤和卵巢良性肿瘤、盆腔良性病变和正常妇女血清，采用双向电泳技术分离和鉴定生理状态与病理状态的差异表达蛋白，对有差异性表达的蛋白质运用MALDITOFTOF串联质谱分析。结果重复性好的双向电泳图谱在CA125阴性卵巢上皮性恶性肿瘤患者血清蛋白质表达谱发生了改变。将其中有差异蛋白点经指纹图谱(PMF)分析，并结合双向电泳相应点的表观等电点、分子质

2、量、匹配片段的多少以及相关文献进行综合分析。得到CA125阴性时的蛋白质有8种，分别为结合珠蛋白α1、prostasin、calgranulinA和calgranulinB、溶血磷脂酸(LPA)、增殖细胞核抗原(PA)、HSP60和90。结论双向电泳质谱法对卵巢上皮性恶性肿瘤患者血清蛋白获得的结果重复性较好。CA125阴性卵巢癌患者血清结合珠蛋白α1、prostasin、calgranulinA和calgranulinB、LPA、PA、HSP60和90能为其提供早期诊断指标。【关键词】双向电泳图谱；C

3、A125；卵巢上皮性恶性肿瘤；血清蛋白【Abstract】ObjectiveToinvestigatethesignificanceofexploringtheassociatedproteininserumofthepatientsalignanttumornegativeCA125.MethodsTheserumfromtheepithelialmalignanttumorofovarynegativeCA125,benigntumor,benignlesionandhealthyeneanso

4、fmassspectrographicinepithelialtumorofovaryolecularquality,theamountofmatchingfragmentandtheassociateddocuments,or,.biningtheserumofthepatientsalignanttumorofovarynegativeCA125or.【Keyor；Proteininserum卵巢上皮性恶性肿瘤早期一般没有临床症状，发现时往往为中晚期，其5年生存率仅25%左右。能早期发现卵巢上皮性

5、恶性肿瘤，其5年生存率>90%。CA125是临床上常用的筛选方法,但阳性率只有50%～60%，而作为单一的标志物，CA125阳性预测值还不到10%，即使在超声技术的辅助下，其阳性预测值只能达到20%［1］。因此，发现特异性的肿瘤标志物，特别在CA125阴性时，是诊断早期卵巢上皮性恶性肿瘤迫切需要解决的问题。本研究取卵巢上皮性恶性肿瘤和卵巢良性肿瘤、盆腔良性病变患者及正常妇女血清(后三者简称正常组)进行CA125检测，并采用双向电泳质谱(tensionalgelelectrophoresisma

6、ssspectrometry，2DEMS)技术来分离和鉴定生理状态与病理状态的差异表达蛋白，为进一步研究卵巢上皮性恶性肿瘤发病机制及有效的诊疗手段提供实验依据。1资料与方法1.1一般资料1.1.1标本采集选择受试者200例，年龄46～68岁，其中CA125阴性的卵巢上皮性恶性肿瘤患者100例，卵巢良性肿瘤患者50例，盆腔良性病变患者(包括子宫内膜异位症、盆腔炎性包块)25例，正常妇女25例，共收集血清200份，置于-70℃冰箱保存。1.1.2主要仪器及试剂仪器：高速冷冻离心机、分光光度仪、电泳仪、冷却

7、水循环系统；试剂：二硫苏糖醇、丙烯酰胺、甲双丙烯酰胺、过硫酸铵、十二烷基磺酸钠等。1.2方法1.2.1血清总蛋白质的提取与定量血清经-70℃反复冻融4次，用特种试剂去除IgG等高丰度蛋白。采用Agilent5K超滤管进行浓缩除盐，冻干回收样品，-70℃保存备用。用裂解液(9MUrea，4%CHAPS，65mMDTT，cocktail酶抑制剂)进行复溶，并采用Bradford法进行蛋白质定量。1.2.2等电聚焦将-20℃保存的IPG胶条，于室温下平衡10min，以70μg上样量于每份样品中加入上样缓冲液，

8、总体积250μl，沿IPG聚焦盘中槽边缘自左向右线性加入，胶面向下轻放入泡胀槽中，加入矿物油覆盖。1.2.3SDSPAGE垂直电泳采用10.0%的均匀SDS聚丙烯酰胺凝胶。20mA电泳15min，然后40mA电泳至溴酚蓝离胶下沿0.5cm。1.2.4凝胶银染电泳结束后，立即予以硝酸银染色，通过固定、敏化、银染、显色、终止等步骤，直至背景清晰。1.2.5图像分析每个样品常规进行3次二维电泳，通过光密度扫描仪对二维电泳凝胶扫描，Imagema