胆汁致胃黏膜损伤中瘦素、环氧合酶

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1、胆汁致胃黏膜损伤中瘦素、环氧合酶【摘要】　　目的通过大鼠实验模型观察瘦素(leptin)、环氧合酶-2(COX-2)及p27在胆汁所致胃黏膜损伤中的作用。方法SD大鼠分成4组：十二指肠胃反流(duodenogastricreflux,DGR)组、DGR+胆管结扎(bileductligation,BDL)组、胆管结扎组(BDL)、假手术组(control,C)组。术后12周处死大鼠，观察胃黏膜损害及病理组织学改变，计算DIXON积分；免疫组化(SP)法检测各组大鼠胃黏膜瘦素、COX-2及p27表达。结果DIXON积分DGR组、DGR

2、+BDL组较BDL组及假手术组积分均升高(P<0.05)，DGR组较DGR+BDL组DIXON积分升高(P<0.05)；DGR组、DGR+BDL组与BDL组及假手术组比较大鼠胃黏膜瘦素、COX-2高表达(P<0.05)，p27低表达(P<0.05)，DGR组比DGR+BDL组高表达尤为明显(P<0.05)。DIXON积分与瘦素、COX-2表达呈正相关，与p27表达呈负相关。结论胆汁反流致胃黏膜损伤过程中，瘦素、COX-2及p27蛋白与病变的修复过程有关。【关键词】胆汁胃黏膜瘦素COX-2p27　　ABS

3、TRACT:ObjectiveToexploretheroleofleptin,COX-2andp27inbile-inducedgastricmucosalinjuryinrats.MethodsSDratsucosaandtightjunctiononths.ImmunohistochemistryucosaorenotablethanDGR+BDLgroup(P<0.05).TheexpressionofleptinandCOX-2ucosalinjuryinrats.　　KEYAPK、磷酸肌醇和脂类代谢等信号通路，参与

4、多种生理功能的调控，维护黏膜上皮完整并促进其增生［2］；COX-2的表达增加了PGE2的合成，诱导细胞增殖并刺激bcl-2蛋白的表达，通过促进细胞增殖，抑制细胞凋亡，使细胞增殖与凋亡失去平衡［3］；p27蛋白可以启动、诱导凋亡，并通过抑制cyclin-CDK复合物的活性来抑制CDKs的活性，从而负性调节细胞周期，抑制细胞增殖［4］。本研究通过SD大鼠十二指肠胃反流模型和结扎胆管后的十二指肠胃反流模型，比较观察了胆汁致胃黏膜损伤后瘦素(leptin)、环氧合酶-2(COX-2)及p27的表达，并观察三者之间的关系。　　1材料与方法　　

5、1.1材料　　健康成年SD大鼠40只，雌雄各半，体重180-200g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供。吻合口缝合采用医用6/0的可吸收缝合线。免疫组化的主要试剂leptin兔多克隆抗体的浓缩液(bs-0108R)购自北京博奥森生物技术有限公司，鼠单抗p27(SC-1641)、COX-2羊多抗IgG(SC-1746)及SP试剂盒(SP-9003、SP-9002)购自北京中杉金桥生物技术有限公司。　　1.2动物的分组及制模　　SD大鼠随机分为4组。胃十二指肠返流(duodenogastricreflux,DGR)组(10只)：参考

6、董西林［5］手术方法制作十二指肠胃反流模型(将距Treitz韧带以下4cm处的空肠侧壁与胃大弯前胃部分的前壁，按顺蠕动方向进行侧侧吻合,再将十二指肠Treitz韧带以下结扎；胆管结扎(bileductligation,BDL)组(10只)：参考张茹［6］手术方法单纯结扎胆管(选胆总管近左右肝管汇合端作结扎,保留胰管通畅，胰液继续排入十二指肠)；DGR+BDL组(10只)：步骤同上述DGR+BDL模型；C组：假手术组(正常对照组，10只)：上腹正中切口进入腹腔，仅翻动胃及肠管，然后关腹。大鼠手术后12周,留取血清、胃液，采用西安派斯公

7、司生产的XDJ-IA型pH监测仪测定胃液pH值，用酶法检测血清总胆汁酸(TBA)。　　1.3HE染色观察SD大鼠胃黏膜的病理组织学变化　　在吻合口附近(包括腺胃部分的胃窦、胃体)黏膜组织4-6块，石蜡包埋，HE染色，光学显微镜下观察病理组织学改变。病理形态学积分标准：依据DIXON反流性胃炎组织学积分标准［7］，按以下胃黏膜病变的轻重程度进行计分：小凹延长，腺颈细胞增生(0-3分)；黏膜浅层血管扩张充血(0-3分)；固有膜内平滑肌纤维增生(0-3分),平滑肌细胞隆起或黏膜层变薄，分别将稍有隆起、隆起占黏膜层1/2或全层隆起记为1-3

8、分，无则记为0分，间质水肿(0-3分)，慢性或中性粒细胞浸润轻到重(0-3分)，记录每个病例的积分。　　1.4免疫组化法检测瘦素、COX-2及p27表达　　所有标本经40mL/L中性甲醛溶液固定制作石蜡切片，载玻片均经多聚赖氨酸防脱片