p38mapk基因诱导胶质瘤细胞凋亡

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1、p38MAPK基因诱导胶质瘤细胞凋亡　　关键词:p38分裂原激活蛋白激酶;基因转染;胶质瘤;凋亡;大鼠　　摘要:目的研究p38MAPK基因转染大鼠胶质瘤细胞系C6后对其生物学特性的影响.方法利用脂质体介导法将p38MAPK基因导入大鼠胶质瘤细胞系C6中，用免疫细胞化学染色检测其在细胞转染前后的表达情况，用HE染色、流式细胞仪等方法研究其对细胞形态、粘着状况和生长周期的影响.结果转染pCMV5-p38MAPK质粒组p38MAPK蛋白表达阳性，细胞形态发生变化，贴壁性降低，出现大量凋亡细胞.结论转染p38

2、MAPK基因可诱导胶质瘤细胞凋亡.　　Keya;apoptosis;rats　　Abstract:AIMTostudytheeffectofp38MAPKtransfec-tiononthebiologicalcharacteristicsofgliomacellC6.METHODSp38MAPKacellC6bylipofectin.Expressionofp38MAPKmunocytochemistry.HEstainingandfloetryeasurethecellmorphology，adh

3、esionandcellcycle.RESULTSp38MAPKacells，erging.CONCLUSIONApoptosisofgliomacellcouldbeinducedbyp38MAPKtransfection.　　0引言　　蛋白质的磷酸化与去磷酸化是传递细胞各种信息的重要转导机制.蛋白激酶催化磷酸基团与蛋白质内特异的氨基酸共价结合.一系列的蛋白激酶及其磷酸化活化构成了信号转导级联反应.丝裂素活化蛋白激酶（mitogen-activatedproteinkinase，MAPK）信号通路是

4、近年来研究较多的蛋白激酶通路.在真核细胞中，已鉴定出4条，即细胞外信号调节蛋白激酶（extracellularsignal-regulatedproteinkinase，ERK）通路，c-Jun氨基末端激酶（c-JunN-terminalkinase，JNK）/应激活化蛋白激酶（stress-activatedproteinkinase，SAPK）通路，ERK5/大丝裂素活化蛋白激酶1（bigMAPkinase，BMK1）通路和p38MAPK通路.它们参与了细胞生长、发育、分裂及细胞间的功能同步等多种

5、生理过程，并参与细胞的恶性转化等病理过程.p38MAPK除在细胞应激、炎症反应中具有重要作用外，也与细胞的发育、分化和凋亡密切相关.胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤，p38MAPK对其生长的调节作用尚不了解.我们将外源性p38MAPK基因转染大鼠胶质瘤细胞系C6，以期研究其对胶质瘤细胞生物学特性的影响，为充实信号转导在胶质瘤中的作用提供理论依据.　　1材料和方法　　1.1材料大鼠胶质瘤细胞系C6由本教研室保存.pCMV5-p38MAPK质粒和兔抗鼠p38MAPK抗体由新加坡国立大学林圣彩教授惠赠.pC

6、MV5质粒由本校生化教研室孙强惠赠.脂质体购自Gibco公司.免疫组化试剂盒购自武汉博士德公司.　　1.2基因转染大鼠胶质瘤细胞系C6在含150mL・L-1小牛血清的RPMI1640培养液中常规培养，细胞生长至对数期时以2×105/孔接种于6孔板，培养24h.将2μgpCMV5-p38MAPK，10μL脂质体分别溶于100μL无血清培养基，两溶液缓慢混匀，室温放置30min，加入0.8mL无血清培养基，混匀后加入上述培养细胞内，常规培养4h后，加入1mL含150mL・L-1

7、小牛血清的培养液，继续培养24h.同法转染pCMV5质粒及未转染C6细胞作为对照.　　1.3形态学检测转染同时制备细胞爬片，转染后30h取出，PBS洗涤2次，950mL・L-1乙醇固定15min，HE染色.　　1.4免疫细胞化学染色细胞爬片处理同上.一抗为兔抗鼠p38MAPK抗体（1∶50），4℃过夜，加入二抗，室温30min，加入SABC复合物，DAB显色，苏木素衬染.　　1.5细胞周期分析3组细胞各约1×106个，经胰酶消化成单细胞悬液，PBS洗涤2次，700mL・L-

8、1冷乙醇固定过夜，用DPAI进行染色，于流式细胞仪进行细胞周期分析.　　2结果　　2.1形态学检测转染pCMV5-p38MAPK质粒后，细胞由原来的多突起形逐渐变为双极或圆形，体积缩小，细胞内空泡增多（Fig1），贴壁性降低，36h后可见部分细胞漂浮于培养液中.pCMV5质粒组和空白对照组无明显变化.HE染色显示pCMV5质粒组和空白对照组细胞形态一致，可见大量核分裂象，转染pCMV5-p38MAPK质粒组核分裂象明显减少，细胞形态改变，密度减低，部分细