白藜芦醇抑制人脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡比较

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1、白藜芦醇抑制人脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡比较作者:常洪波,章翔,甄海宁,费舟,曹卫东【摘要】目的探讨白藜芦醇(Resveratrol,Res)体外抑制U251、U87和SHG44脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡的不同作用比较,验证Res确可导致U251细胞凋亡。方法MTT比色法测量不同剂量的Res作用U251、U87和SHG44胶质瘤细胞24h后对增殖的影响及不同剂量的Res作用U251、U87和SHG44细胞6h、24h、48h后的影响。流式细胞仪用AnnexinVFITC和PI双染检测U251、U87和SHG44细胞凋亡率。HE染色、Ho

2、echst33342荧光染色、透射电镜(TEM)观察U251细胞形态改变,流式细胞仪测定U251细胞的细胞周期改变。结果Res明显抑制U251、U87和SHG44细胞的生长和增殖(P<0.01)且对U87细胞的抑制作用最强,U251和SHG44细胞次之;对U251细胞的抑制作用呈浓度及时间依赖性反应;Res所致的U251、U87和SHG44胶质瘤细胞凋亡为浓度依赖关系,且对U87细胞的凋亡作用强于U251和SHG44细胞。U251凋亡细胞的细胞周期主要发生G1期阻滞。结论Res对U251、U87和SHG44细胞生长抑制及凋亡作用以U87

3、细胞更明显,对U251细胞的抑制作用呈浓度及时间依赖性反应并引起了其细胞周期改变。【关键词】白藜芦醇;胶质细胞瘤;细胞凋亡  parisonStudyonResveratrolSuppressingHumanGliomaCellsGroa;Apoptosis  0引言Res是一种多酚类化合物,化学名为3,5,4’三羟基反均二苯代乙烯(3,5,4’trihydroxystilbene,C14H12O3),分子量228.2[1]。近年来对其抗肿瘤作用研究较广泛。本研究旨在证明Res可抑制人源脑胶质瘤细胞系U251生长并导致其发生凋亡及细胞周期

4、改变,探讨生长抑制与剂量、时间及凋亡与剂量的关系,并与Res抑制U87及SHG44脑胶质瘤细胞生长及诱导凋亡的作用比较。  1材料与方法  1.1材料Res购自Sigma公司,用DMSO溶解配成200mmol/L贮存液-20℃冻存备用;U251、U87和SHG44细胞系由本研究所提供;DMEM培养基购自Gibico公司;胎牛血清购自灏洋生物公司;MTT、Hoechst33342荧光试剂盒、AnnexinVFITC和PI均为Sigma公司产品。  1.2方法  1.2.1细胞培养  U251、U87和SHG44细胞在含10%胎牛血清的DME

5、M培养液中,置于37℃、5%CO2孵箱中培养,0.25%胰蛋白酶消化传代。  1.2.2MTT法  实验首先进行3种细胞Res处理24h的生长状态比较,取对数生长期U251、U87和SHG44细胞,接种至96孔板内;实验按3种细胞分3组,每组将Res分7个不同浓度梯度,分别为5、25、50、100、200、300、400μmol/L的处理组及浓度为0μmol/LRes的等量DMSO的对照组,每种浓度设6个重复孔,并以空白孔调零。各组细胞培养24h后,将培养液换成含不同浓度Res的培养液,继续培养24h,随后每孔加入20μl、5g/L的MTT,继

6、续培养4h,最后每孔加150μlDMSO振荡10min,酶标分析仪检测490nm波长的光密度值(Opticaldensity,OD)。其次按照同样方法进行Res处理U251、U87和SHG44细胞6h、24h、48h的分组及其细胞生长状态的MTT法OD值测量。所得数据用SPSS10.0软件计算均数及标准差,并进行方差分析,组间差异采用Duntt检验。  1.2.3流式细胞仪检测细胞周期及AnnexinVFITC和PI双染检测细胞凋亡率  消化收集200μmol/LRes处理24h的U251细胞及对照组细胞,调整细胞浓度1×106/ml各取4

7、ml,按常规细胞周期样品检测方法作程序性处理后进行流式细胞仪检测;分别消化收集300、150、50、5μmol/LRes处理24h组的U251、U87和SHG44细胞和DMSO对照组的细胞,加入5μlAnnexinVFITC和5μlPI于细胞悬液中避光染色10min,流式细胞仪检测凋亡的百分比,数据用multicycle分析软件处理。  1.2.4凋亡细胞的光镜观察  将U251传代细胞接种于盖玻片表面,培养24h后,换成含200μmol/LRes的DMEM培养液,继续培养24h后,HE染色,光镜观察。  1.2.5凋亡细胞的Hoechst3

8、3342荧光检测  200μmol/LRes处理24h的U251细胞按荧光染色试剂盒方法逐步进行后荧光显微镜下摄片。  1.2.6凋亡细

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