β-羟基异戊酰紫草素对人卵巢癌细胞株skov3体外作用及其机制的实验研究

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1、此页作为扉页放在学位论文封面后浙江中医药大学研究生学位论文原创性声明木人郑重声明：木人所提交的学位论文《（3-羟基异戊酰紫草素对人卵巢癌细胞株SKOVs体外生长的影响及其作用机制的实验研宄》是本人在导师的指导下，进行的研宄工作及取得的研宂成果。除文屮已经加以标注引用的A容外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明和致谢。本声明的法律结果由本人承扪。学位论文作者签名：张洁签字日期：2009年4月120学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江中医药大学有

2、关保留、使用学位论文的规定，同意浙江中医药大学保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江中医药大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于、保密

3、1，在5

4、年解密后适用本授权书。、不保密（请在以上相应方框内打“V”）学位论文作者签名：张洁指导教师签名：沈敏鹤签字口期：09年4月12口签字口期：2009年4月12口（3-羟基异戊酰紫草素对人卵巢癌细胞株SKOVJ本外作用及其机制的实验研宄中文摘要目的探讨P-羟

5、基异戊酰紫草素（P-HIVS）对人卵巢癌细胞株SKOV;体外生长的影响及其机制。方法以p-HIVS处理的人卵巢癌细胞株SKOVs,采用四甲棊偶氮唑蓝（MTT）比色法,测定（3-HIVS对SKOVs细胞体外生长的抑制作用，以及与顺铂的联合作用，并绘制剂量-效应曲线；通过倒置显微镜观察不同浓度p-HIVS作用于SKOVs细胞形态的变化，评定药物效应等级；通过流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测药物诱导SKOV;细胞凋亡的比例；应用Western-Blot法检测药物作用后Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果不同浓度2-30umol/Lp

6、-HIVS均可抑制SKOV;细胞增殖，并呈浓度依赖性，半数抑制率IC50=7.37umol/L；p-HIVS与顺铂联合应用，较顺铂单药作用明显增强。在一定浓度范围内，p-HIVS与顺铂的协同作用呈现对（3-HIVS浓度的依赖性；倒置显微镜观察可以看到较为典型的细胞凋亡形态学改变；流式细胞仪检测结果显示：与对照组相比，经P-HIVS处理后的细胞早期凋亡和坏死的比例均有明显升高，信号集中在AnnexinV+/PI-象限。WesternBlot检测结果表明：经（3-HIVS处理的SKOVs细胞，随着剂量增加，Bcl-2蛋白表达逐渐减少，Ba

7、x蛋白表达逐渐增加。结论p-HIVS对人卵巢癌细胞株SKOVs体外生长有明显的抑制作用，且具有浓度依赖性。P-HIVS对顺铂具有协同增敏作用，且随着药物浓度的增高，这种作用表现的更为显著。诱异凋亡是其主耍机制之一。主题词p-HIVS,卵巢肿瘤，生长抑制，细胞凋亡，联合疗法AStudyonAntitumorEffectofp-HIVSAndItsMechanisminHumanOvarianCancerCellLineSkov3inVitroABSTRACTObjective：Toobservetheovariancancercelll

8、ineSKOV3intervenedbyp-HIVSanditsantitumormechanisminvitro.Methods：Methylthiazolyltetrazolium(MTT)assaywasusedtoestablishthedose-effectcurvesandthesynergeticeffectofP-HIVSandcisplatin.Themorphologicalchangesofthecellwereobservedbytransmissionelectronmicroscopeinordertoev

9、aluatecellapoptosis.Theflowcytometry(FCM)wasusedtoobservetheapoptosisrate.TheexpressionofBcl-2andBaxwasdetectedbyWesternblotting.Result：ThegrowthinhibitionofSKOV3byp-HIVSwasdose-dependentand50%inhibitionrateis7.37uM/L.p-HIVScombiningwithcisplatinobviouslyincreasedtheinh

10、ibitotyrateandapoptosisrateofSKOV3thanthoseofthecorrespondingindividualcisplatingroups(P<0.05).Withinacertainc