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1、HPLC法测定骨痛灵巴布剂中雪上一枝蒿甲素含量：李军红 金日显 赵彬 李曼玲 刘淑芝【摘要】：目的建立骨痛灵巴布剂中有效成分的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,Kromasil-C18色谱柱,pH7.3的磷酸盐缓冲溶液-甲醇(28∶72)为流动相,检测波长210nm,测定骨痛灵巴布剂的有效成分雪上一枝蒿甲素的含量。结果雪上一枝蒿甲素在0.2120～4.7700μg范围内线性关系良好(r＝0.99999),平均回收率100.10%,RSD＝2.53%。结论该方法精密度高,回收率稳定,重复性好,可以用于骨痛灵巴布剂的质量控制。【关键词】骨痛灵 巴布剂 雪上一枝蒿甲素 高
2、效液相色谱法 Abstract：ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofBullatineAinGutonglingBabuplaster.MethodTheBullatineAinedbyHPLConKromasil-C18column,andthemobilephaseconsistedofphosphatebufferedsolution(pH7.3)-methanol(28∶72),thedetection.ResultAgoodlinearrelationshipofBullatineAethodisa
3、ccurateandreliable,andcanbeusedforqualitycontrolofGubitongBabuplaster. Keypoasil-C18(250mm×4.6mm,5μm)；检测波长：210nm；柱温：35℃；流速：1mL/min；流动相：磷酸盐缓冲液(磷酸氢二钠1.97g,磷酸二氢钾0.22g,加水溶解并稀释至1000mL,用80%磷酸溶液调节pH至7.3)-甲醇(28∶72)[1]。 2.2供试品溶液的制备 取骨痛灵巴布剂,揭去保护膜,对折后剪碎,置锥形瓶中,加入氨试液15mL,振摇,使巴布膏均匀、充分的完全吸收氨试液；精密加入氯
4、仿50mL,称定,水浴回流2.0h,取下,放至室温,称定,用氯仿补足减失的重量,摇匀,静置；精密吸取氯仿液25mL,水浴蒸干,残渣加甲醇超声溶解,转移,甲醇定容至10mL；用0.45μm微孔滤膜过滤,进样测定。HPLC图谱见图1。 2.3标准曲线的绘制 取雪上一枝蒿甲素对照品适量,精密称定,甲醇溶解,制成0.1060mg/mL的对照品溶液。取对照品溶液分别进样2、4、8、15、20、30、45μL；以进样量为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,计算回归方程,结果：Y＝704672X＋31485,r＝0.99999,表明雪上一枝蒿甲素在0.2120～4.7700μg之间线性关
5、系良好。 2.4精密度试验 取对照品溶液连续重复进样6次,每次进样20μL,记录峰面积,计算平均值,RSD＝0.80%(n＝6)。表明本方法精密度良好。 2.5稳定性试验 取供试品溶液分别在0、3、6、9、12、24h重复进样,每次20μL,测定峰面积,计算,RSD＝1.48%。表明供试品溶液在24h内稳定性良好。 2.6重复性试验 取同批骨痛灵巴布剂6片,揭去保护膜,对折后剪碎,混合,称取6份,按“2.2”项下方法制备供试品溶液,分别进样测定,计算含量及平均值,结果RSD＝0.86%(n＝6)。 2.7回收率试验 取已知含量的骨痛灵巴布剂,揭去保护膜,对折后
6、剪碎,称量,加入雪上一枝蒿甲素对照品,按“2.2”项下方法进行实验,制备供试品溶液,进样测定,计算,结果平均回收率为100.10%,RSD＝2.53%(n＝6)。表1骨痛灵巴布剂雪上一枝蒿甲素加样回收试验(略) 2.8含量测定 按“2.2”项下方法实验,制备供试品溶液,分别进样,测定3批骨痛灵巴布剂中雪上一枝蒿甲素的含量,结果见表2。表23批骨痛灵巴布剂中雪上一枝蒿甲素的含量测定（略） 3讨论 巴布膏的含量测定难点在于排除基质的影响,找到最简单、可靠的方法。前期的预实验结果表明,由于中药巴布膏由中药提取浸膏、多种水溶性骨架材料、甘油、氮酮等组成,对供试液的制备带来
7、很大的影响。雪上一枝蒿是本制剂的君药,又属有毒药物,测定其有效成分雪上一枝蒿甲素的含量对制剂的质量控制具有重要意义。本研究确定了一种简单、可靠、重复性好的含量测定方法,可以作为骨痛灵巴布膏的质量控制指标。 实验中进行了供试品溶液制备的方法学研究：①对提取溶媒进行比较,结果发现甲醇使巴布膏皱缩,某些辅料能溶解其中,使提取液的杂质太多,后续的处理繁琐；乙醚的提取率较低；在加入氨试液后氯仿的提取率高,并且处理方法简单,能够达到测定的要求。②对氨试液加入量的选择,在保证巴布膏能够均匀充分湿润下10、15、20mL结果差别不大,选择15mL作为巴布
