大鼠海洛因依赖期间睾丸cga

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1、大鼠海洛因依赖期间睾丸CgA【关键词】嗜铬颗粒；睾丸；海洛因依赖；免疫组织化学；大鼠，Sprague-DaograninAimmunoreactive(CgA-IR)cellsinrattestisduringheroindependence.Methods:ImmunohistochemicalSABCmethodandimagineanalysisorphologicalandfunctionalchangesofCgA-IRcellsinrattestisduringheroindependence.Results:T

2、heCgA-IRcellsiniferoustubules,andthepositivesubstances.Asparedalcontrolgroupandsalinecontrolgroup,inheroindependentgroupthenumberofCgA-IRcells(P<0.05),andtheimmunohistochemicalstainingintensitydecreasedevidently.Theresultofimageanalysisshoberandthesecretionfunct

3、ionoftestisCgA-IRcellsdecreaseduringheroindependenceightbeinvolvedinthephysiologicalregulationofheroindependence.　　［Keyaffingranules;testis;heroindependence;immunohistochemistry;rats,sprague-dag/kg，2次/d(上午8时，下午3时)，连续9d至成瘾，第9天剂量为27mg/kg。此后成瘾大鼠每日上午8时注射1次，维持剂量为27mg/kg

4、，直至取材。SCG大鼠按体重每日注射与HDG相当剂量的生理盐水，并与HDG大鼠同时处死。NCG不予任何处理，常规喂养。　　1．2取材及标本处理　　　　HDG及SCG大鼠分别于模型建立的第10、17、24、31、38天取材，每次每组处死5只，NCG同期取1只处死。取睾丸标本，多聚甲醛液固定，常规石蜡包埋，制成4μm厚的连续切片，切片间隔56μm。　　1．3免疫组织化学SABC法　　按照免疫组织化学SABC法进行染色。主要步骤：切片常规脱蜡入水，10%甲醇-H2O2室温下10min，正常山羊血清（1:50）封闭室温下20min，

5、依次滴加一抗（兔抗CgA血清，工作浓度1∶100，武汉博士德生物工程公司提供）4℃孵育过夜，羊抗兔IgG（1∶100）37℃孵育20min，SABC复合物（1∶100）37℃孵育20min，DAB-H2O2室温下显色，水洗，苏木精复染细胞核，中性树胶封片。方法对照采用PBS缓冲液代替CgA抗血清。　　1．4图像分析　　　　随机选取HDG组与SCG组第10、17、24、31、38天切片，每组每个时间点3例，NCG组3例，应用BioMias图像分析系统进行检测。在40倍物镜下，每例随机选取5个视野，测CgA-IR细胞的平均灰度值

6、，并计数每个视野的有核阳性CgA-IR细胞数。应用SPSS11.5软件包对所得数据进行统计分析，P<0.05差异具有显著性。　　2结果　　2．1CgA-IR细胞免疫组织化学观察　　　　光镜下，在生精小管之间的睾丸间质内可见到CgA-IR细胞，阳性细胞定位同睾丸间质细胞。经DAB-H2O2液显色后，免疫阳性产物呈棕黄色细颗粒存在于胞质内，方法对照切片未见阳性细胞。贵阳医学院学报33卷6期郭斌等大鼠海洛因依赖期间睾丸CgA-IR细胞的免疫组织化学研究SCG各组时间点与NCG组睾丸CgA-IR细胞的分布、形态和免疫染色强度未

7、见明显差别，SCG组各时间点之间也无明显差别。与NCG和SCG比较，HDG各时间点睾丸CgA-IR细胞分布未见明显变化，但CgA-IR细胞的免疫染色强度明显减弱（图1）。　　2．2CgA-IR细胞的图像分析结果　　2．2．1CgA-IR细胞的平均灰度值　　如表1所示，SCG组与NCG组CgA-IR细胞平均灰度值差异无显著性（P﹥0.05）；SCG组各时间点之间CgA-IR细胞平均灰度值的差异也无统计学意义（P﹥0.05）。HDG组与NCG、SCG组比较，CgA-IR细胞的平均灰度值显著增高（P﹤0.05）。　　3讨论　　　　

8、近年来的研究认为，CgA是存在于神经内分泌细胞和肿瘤细胞中的最为特异、敏感和可靠的标记物。用免疫组织化学和免疫测定法，CgA可鉴定神经内分泌肿瘤，包括嗜铬细胞瘤、甲状旁腺瘤、肺小细胞癌等[3，4]，并有助于肿瘤的分型及预后的判断[5]。CgA是一种水溶性酸性糖蛋白，还存在于多种动物的神经元