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1、大鼠脊柱种植性肿瘤模型的建立【关键词】脊柱疾病;脊椎肿瘤;疾病模型,动物ABSTRACT:ObjectiveToestablishaspinaltumormodelorsegmentplantmethod.MethodsSHZ-88mammarycancercelloftheratalenep.Thentumorsegmentsbarvertebralofthefemalethymectomizesrats,toestablishratspinaltumormodel.ResultsTheinvolvedve
2、rtebralbodiesortissueappearsgray-odelofspinaltumorormodelinratsimulatedthemalignanttumorcharacter,etastasisspinalneoplasms,andparisonsofthecurativeeffectsofdifferenttherapies.KEY-1000A型,苏州安泰空气技术有限公司)。CO2培养箱(3111型,美国ThermoForma公司)。1×70荧光倒置式相差显微镜(日本Olympus公司)
3、。光学显微镜(BH-2型,日本Olympus公司)。显微外科手术器械、玻璃培养瓶、培养皿、X线摄片机(美国Kodak公司)。 1.2方法 1.2.1乳腺癌细胞培养 SHZ-88大鼠乳腺癌细胞培养于含10%胎牛血清的FCS1640培养液,隔天换液,2~3d传1代。 1.2.2建立脊柱肿瘤动物模型 1.2.2.1皮下肿瘤模型 取处于对数生长期的细胞消化后,用无血清的培养液稀释成1×107mL,各取0.3mL注入8只7日龄雌性SD大鼠右腋皮下,并用棉签局部压迫1min,防止悬液漏出。每日观察肿瘤生长情况
4、。瘤块增大至约1.5cm×1.0cm,取肿瘤组织用10%福尔马林溶液固定,作病理切片,H-E染色。 1.2.2.2去胸腺模型 参照文献［4］方法去除SD大鼠的胸腺。 1.2.2.3脊柱肿瘤模型 将去胸腺SD大鼠20只,随机分为模型组与对照组,每组10只。10%水合氯醛麻醉、固定、消毒。取腹部正中切口,逐层进入腹腔,暴露腹腔后壁。以旋髂深动脉为定位标志,打开后腹膜,显露第6腰椎,用磨钻在椎体上开口,并在椎体中磨造出一个口小底大的空腔(图1)。取皮下肿瘤瘤体,置于无血清培养液中,剪成直径约0.5mm瘤块。
5、将瘤块填入模型组椎体空腔内,对照组不填入瘤块,用骨蜡封闭开口,逐层缝合。每日观察大鼠生长情况,第2周X线摄片检查肿瘤生长情况,处死后取出椎体标本,病理切片,H-E染色检查。 2.2皮下肿瘤模型 细胞接种当天局部可见由细胞悬液形成的液泡,第2日液泡吸收,局部变平整。接种5d后可触及皮下结节,其后瘤块生长迅速,接种12d左右后瘤块可增大至约1.5cm×1.0cm,成瘤率100%。肿瘤组织呈鱼肉样,并可见坏死,病理切片H-E染色见肿瘤细胞交织排列,大小不一,形态不规则,异形性明显,细胞核大小不一,深染,病理性核
6、分裂像易见。 2.3去胸腺模型 为提高成年SD大鼠的成瘤率,先行胸腺摘除,破坏其自身免疫系统。分离胸腺两叶下极时,切口即与胸腔相通,出现气胸症状,应迅速游离下极摘除胸腺,收紧缝线,关闭切口,并立即对右胸腔穿刺抽气,症状可迅速缓解。大鼠胸腺分为左右两叶,应仔细检查取出的胸腺组织是否完整,若不完整,则不能作为去胸腺鼠模型。脊柱肿瘤植入手术在术后5d后进行,以恢复大鼠对后续手术的耐受力。 2.4脊柱乳腺癌种植瘤模型 术中、术后均无死亡。术后3d内,在饮水中加入适量抗生素,预防切口感染。2组切口愈合较好,未见
7、明显感染者。部分出现左下肢跛行,可能系术中剥离腰大肌时神经牵拉引起,于术后5~10d内均恢复正常。术后15d时X线检查见植入部位椎体前缘凹陷,瘤块植入组椎体骨质密度较对照组略有改变,但不明显(图2)。处死后,显露肿瘤植入椎体,模型组8只见椎体表面有隆起的软组织肿块,其余未见肿瘤生长。对照组均未见肿瘤生长。15d2组均未见明显神经功能改变。暴露病变节段的椎体,模型组8见椎体表面有软组织肿块形成,成瘤率为80%,而对照组中未见肿瘤形成。 2.5肿瘤病理学 病变节段大体标本见椎体表面有明显隆起的软组织肿块形成,
8、包裹部分椎体表面,矢状面上见椎体骨质凹陷,为肿瘤组织呈鱼肉样,已填满空腔。镜下见肿瘤周围骨质吸收,形成的骨质缺损较原有的空腔大,肿瘤组织向周围骨质浸润,形成一半环形浸润带。椎体中央见一肿瘤组织,并向周围骨小梁中浸润生长(图3),但未突破椎体后壁。 3讨论 3.1本脊柱肿瘤动物模型的特点 SHZ-88大鼠乳腺癌细胞株是南京铁道医学院于1987年用7,12-二甲基苯蒽(DMBA)在雌性SD大鼠上诱
