不同条件下人免疫球蛋白类制品hcv抗体检测结果的比较

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1、不同条件下人免疫球蛋白类制品HCV抗体检测结果的比较【关键词】人免疫球蛋白HCV抗体ELISA用酶联免疫吸附（ELISA）方法对原料血浆实施HBsAg、HCV抗体和HIV抗体的筛查有利于保障原料血浆的安全［1］。目前对原料血浆的筛查采用单采血浆站使用一种诊断试剂进行初筛，血液制品生产企业使用不同厂家的另一种诊断试剂进行复查，即便经过了两次严格的逐袋筛查，仍有因隐匿性丙肝感染而导致漏检的。目前公认，采用ultiskanMk3（芬兰雷勃公司生产），洗板机，型号：Wellk2（芬兰雷勃公司生产），检测按仪器和试剂盒要求操作。1.3稀释方法（1）样品A低pH放孵病毒灭活

2、后的免疫球蛋白原液，不含任何稳定剂，pH3.8～4.1；样品B：低pH放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，按生产工艺要求配制为肌肉注射人免疫球蛋白，含氯化钠、甘氨酸、麦芽糖、硫柳汞，作为稳定剂，pH6.7～7.0；样品C：低pH放孵病毒灭活后的免疫球蛋白原液，按生产工艺要求配制为静注人免疫球蛋白，含麦芽糖作为稳定剂，pH3.8～4.1。分别使用生理盐水和相应的诊断试剂盒的稀释液将以上三类样品的蛋白浓度稀释为1%，pH值不做调整，为原制品pH值，所得样品编号为ⅠA1、ⅠA2；ⅡB1、ⅡB2；ⅠC1、ⅠC2，1为生理盐水稀释，2为诊断试剂盒稀释液稀释，Ⅰ为酸性条件下样品

3、；Ⅱ为中性条件下样品。（2）将样品A的pH值调整为6.7～7.0；将样品B的pH值调整为3.8～4.1；将样品C的pH值调整为6.7～7.0，按方法（1）稀释以上样品，所得样品编号为ⅡA1、ⅡA2；ⅠB1、ⅠB2；ⅡC1、ⅡC2。所得样品按各诊断试剂厂家说明书进行检测，灰区为CO值±15%的范围。　　2结果应用不同稀释方法所获得的样品，用不同厂家的试剂盒进行检测，每个样品检测两孔，检测结果见表1。表110批不同条件的样品四个不同厂家试剂HCV抗体检测结果3讨论以上结果表明，10批人免疫球蛋白类制品，对免疫球蛋白原液、人免疫球蛋白和静注人免疫球蛋白制品进行检测使用

4、生理盐水稀释［3］和使用试剂盒稀释液稀释，然后按检测试剂说明书进行检测，其结果是完全一致的。经对免疫球蛋白原液（不含任何稳定剂），人免疫球蛋白（含稳定剂），静注人免疫球蛋白（含稳定剂），检测结果表明，不同的制品所含稳定剂与否对检测结果也没有影响；在低pH条件下，免疫球蛋白原液（低pH放孵后），静注人免疫球蛋白(pH4)经两种不同稀释液稀释，发现厂家B的检测试剂盒10个批次的检品OD值均在灰区内，另外三个试剂厂家的检测结果均为阴性。文献报道用ELISA法检测HCV抗体灰区血样经重复检测有12.6%（11/87）的假阴性率［4］，并且对落在灰区范围内的随机抽样样本进

5、行的PCR检测，HCVRNA的阳性率为18%（3/11）。表明灰区内样本确实存在着病毒复制［5］，如果不设置灰区，就有可能造成漏检，因此，为了提高制品安全性，灰区的设置有着重要的意义［6］。但是，不同HIV抗体检测对丙型肝炎的检测结果有明显差异［7，8］。ELISA试剂生产厂家包被的抗原片段和生产工艺存在差异是影响试剂盒质量的主要因素［9，10］，但是从另外三家诊断试剂盒的检测结果和B厂家对同一批号制品在低pH条件下的结果来看，样品的低pH值是影响厂家试剂检测结果并导致样本落在灰区的原因。由低温乙醇法分离工艺并经低pH放孵病毒灭活后制备的人免疫球蛋白类制品是安全

6、的，但是在成品检测过程中，由于静注人免疫球蛋白（pH4）制品的酸性特点，有可能使个别厂家生产的诊断试剂盒检测的样品的OD值落在灰区内，甚至造成误判的情况。为提高血液制品的安全性，国家食品药品管理局要求对血液制品生产用原料血浆实施“检疫期”，经对供浆者血浆样本再次进行病毒筛查并检验合格，方可投入生产。除此之外，还应积极摸索和建立免疫球蛋白类制品检测HIV抗体、HCV抗体的方法及标准，随着此项工作的不断深入，笔者认为，对影响HCV抗体、HIV抗体检测结果各种因素，会逐步找到解决的方法。【参考文献】1杨守纯，陶其敏.我国病毒性肝炎免疫学检测历史回顾与展望.中华检验医学

7、杂志，1999，22（1）：275-277.2倪道明.血液制剂安全性及其对策（1991年单采血浆会议资料）.3罗时定，邓远运,刘素芳,等.检测献血者及人血液制品中HCV抗体结果及分析.中国输血杂志，1994，7（增刊）：58-59.4刘朋来，杜菊仙，沈新华.ELISA检测是抗-HCV灰带区血样的处理.中国输血杂志，2003，16（1）：25.5许斌，韩光宇，程梅.血液HBsAg、抗-HCV复检中应采用不同试剂和设置低限灰区.临床检验杂志，1998，16（6）：340.6佘毅敏，黄锦红，周晓真,等.抗-HCV检测设置灰区的探讨.中国输血杂志，2006，19（2）：

8、136-137.7孙爱玉