no参与angⅱ诱导心肌成纤维细胞胶原含量的变化

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1、NO参与AngⅡ诱导心肌成纤维细胞胶原含量的变化：周有华，王杨，董战玲，符史干【摘要】目的：探讨NO前体LArg和NOS抑制剂LNAME在血管紧张素Ⅱ诱导CFs胶原合成中的作用。方法：用胰酶消化法分离、纯化、培养新生SD大鼠CFs,采用CFs羟脯氨酸含量测定、以羟脯氨酸标准曲线求出样本中羟脯氨酸含量，胶原含量以羟脯氨酸含量×7.4表示。结果：(1)在培养液中加入AngⅡ109～105mol/L，CFs胶原含量呈明显的剂量依赖性;(2)分别给予Saralasin和PTX对CFs胶原含量均无明显影响

2、，但可明显抑制AngⅡ增强CFs胶原含量的作用;(3)预先给予NO前体LArg，再加入AngⅡ，AngⅡ增加CFs胶原含量的效应明显减弱;(4)加入NOS抑制剂LNAME后，再加入LArg和AngⅡ，明显减弱LArg对AngⅡ的抑制作用;(5)在用LNAME抑制NOS的基础上，再加入AngⅡ，其AngⅡ促心脏CFs的作用进一步增强,而单纯应用LNAME对基础状态CFs胶原含量无明显影响。结论：AngⅡ能剂量依赖性增加CFs胶原含量，此效应是通过AngⅡ受体实现的，可能部分依赖于PTX敏感的G

3、蛋白;NO明显抑制AngⅡ增加CFs胶原含量的作用，CFs内可能存在LArgNO通路，该通路在调控AngⅡ增加CFs胶原含量中有重要作用。【关键词】血管紧张素Ⅱ;一氧化氮;心肌成纤维细胞;Saralasin;百日咳毒素;NG硝基左旋精氨酸甲酯[ABSTRACT]Objective:Toinvestigatetheeffectsofnitricoxide(NO)precursorLArgandNOSinhibitorLNAMEoncollagensynthesisinducedbyangiote

4、nsinⅡ(AngII)incardiacfibroblast(CFs).Methods:TheCFsofneonatalSDratethod.HydroxyprolineconcentrationofCFsinedandcalculatedbyhydroxyprolinestandardcurve,andthecollagenconcentrationesofhydroxyprolineconcentration.Results:(1)E,aNOSblocker.(5)Theinducingeffec

5、tofAngⅡinCFscollagensythesisanner,ediatedbyAngⅡreceptorandprobablymaybepartiallydependentonPTx-sensitiveGprotein.NOcansignificantlyinhibitedAngⅡformtheinducingcollagensythesis.TheLArgNOpathayexistinCFsandprobablyplayanimportantroleintheprocessofthecoll

6、agensythesisinducedbyAngⅡ.　　[KEYE)　　心脏由心肌细胞和以胶原为主的细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)组成。心肌细胞占心脏总体积的75%，但细胞数仅占心脏细胞总数的1/3，其余2/3为非心肌细胞，包括心肌成纤维细胞(cardiacfibroblasts，CFs)、内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞等，其中CFs达90%以上。CFs是心肌细胞外间质改建的主要细胞，虽无收缩功能，但具有增殖能力，可产生和分泌胶原、纤维粘连蛋白等ECM，从而导致心脏间质胶原

7、累积、血液供应障碍及功能(特别是舒张功能)受损。CFs在心脏组织结构及功能的重构中具有重要的作用[13]，它参与心脏重构(Cardibcremodelling)的3个过程，即心肌细胞肥大、CFs增殖和ECM的累积。一方面，CFs在未受到刺激时具有旁分泌功能，能分泌肥大因子促进心肌细胞肥大[4，5];另一方面，某些生长因子如AngⅡ[6]和去甲肾上腺素[7]既可促进CFs增殖，也能通过CFs分泌生物活性物质来介导心肌细胞肥大。心肌细胞外间质数量和质量的改变可增加心肌舒张阻力,促进组织内电弥散,易于发生心

8、律失常、心力衰竭和心性猝死[8]。新近的研究表明，NO可抑制AngⅡ诱导的CFs增殖和DNA合成速率[9]。但是AngⅡ对新生大鼠心脏CFs胶原合成及其机制尚未完全清楚，NO在AngⅡ对心脏CFs影响中是否起作用也未完全阐明。本实验通过纯化培养新生大鼠的CFs，检测CFs羟脯氨酸含量的变化，以羟脯氨酸含量×7.4表示CFs胶原含量，探讨NO在AngⅡ诱导心肌成纤维细胞胶原合成中的作用及其机制，为心肌纤维化的发生机制和临床防治提供的实验资料。