hplcms法测定人血浆中羧甲司坦浓度

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1、HPLCMS法测定人血浆中羧甲司坦浓度【关键词】羧甲司坦;高效液相色谱离子阱质谱;血药浓度ABSTRACT:ObjectiveToestablishasensitive,validandrapidhighperformanceliquidchromatographytrapmassspectrometry(HPLCMS)methodfordeterminingcarbocisteineconcentrationinhumanplasma.MethodsPlasmasamplesL/Lperchloricacidtoremovet

2、heinterferenceprotein.Thesupernatantasamples,andselectiveionmethodofmultiplereactionmodesinetheconcentrationofcarbocisteine.ResultsThelimitofdetectionLandthelinearrangeL.Therecoveryrateethodcouldbeusedtodeterminecarbocisteineinbiologicalsamples.　　KEYanceliquidchromatogra

3、phytrapmassspectrometry;plasmadrugconcentration　美羧伪麻片是临床广泛应用的一种感冒药，主要成分为羧甲司坦、盐酸伪麻黄碱和氢溴酸右美沙芬。羧甲司坦具有祛痰作用，能使支气管的黏液分泌减少，痰黏度下降而易被咳出，用于治疗慢性支气管炎、支气管哮喘等症[1]。文献采用高效液相色谱蒸发光检测法或荧光检测法测定其制剂或血浆中羧甲司坦的浓度[24]，但方法灵敏度低，特异性不佳。王晓娟等[5]采用柱前在线衍生荧光检测法测定了人血浆中羧甲司坦的浓度，方法灵敏度高，有望广泛应用于该药的药代动力学研究，但费时

4、费力，方法稳定性有待提高。本文采用高效液相色谱离子阱质谱法测定了口服美羧伪麻片人血浆中羧甲司坦的浓度，方法灵敏度高，特异性强，为生物样品中羧甲司坦的测定提供了方法。　　1仪器及试剂　　1.1药品与试剂Agilent1100系列高效液相色谱仪(包括二元梯度泵，7725i手动进样器，DAD二极管阵列检测器，Agilent4.02工作站);Agilent1100系列SL型电喷雾离子阱质谱;SartoriusBP221s型电子天平(万分之一，德国Sartorius公司)。　　羧甲司坦对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号为100246950

5、1);美羧伪麻片(汕头金石制药总厂，批号为080303);甲醇为色谱纯(美国Fisher公司);其他试剂均为分析纯。　　2方法与结果　　2.1对照品溶液的制备精密称取羧甲司坦对照品4.0mg，用甲醇溶解至10.0mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制备成为0.4mg/mL的羧甲司坦对照品溶液。　　2.2空白血浆供试品溶液的制备精密吸取混合人空白血浆0.5mL于1.5mL圆底离心管中，加入1.0mL(100mL/L)高氯酸水溶液，漩涡混合1min，6000r/min离心10min，取上清液0.5mL备用。　　2.3含药血浆供试品溶液的制

6、备6名健康男性受试者，按药品说明书空腹口服美羧伪麻片2片，于服药后0.5h收集血浆样品1.0mL，混合后，按2.2项下方法制备样品，即得含药血浆供试品溶液。　　2.4分析方法色谱条件：色谱柱为AgilentTCC18(150mm×4.6mm，5μm);流动相为10.0mmol/L甲酸水溶液(pH2.2)∶甲醇=92∶8(V∶V);柱温为25.0℃;流速为0.8mL/min(柱后3∶1分流)。　　质谱条件电喷雾离子源正离子模式;喷雾电压3.5kV;毛细管电压-3200V，干燥气流速8.0L/min;干燥气温度350℃;雾化气压力40ps

7、i;雾化气温度325℃;质量扫描范围50～1000amu。此条件下，空白血浆、羧甲司坦标准品和含药血浆供试品溶液总离子流图见图1。　　2.5.2精密度取空白血浆1.0mL，加入适量的羧甲司坦对照品溶液，按2.2项下方法制备成低、中、高3个浓度的羧甲司坦血浆样品供试品溶液，在1d内按样品测定法重复测定5次，计算日内相对标准偏差分别为2.7%、1.5%和1.2%(n=5)。将上述3个浓度的血浆样品在6d内陆续各重复测定5次，计算日间相对标准偏差分别为4.3%、3.1%和2.7%(n=5)。　　2.5.3稳定性①冻融稳定性：将低、中、高3个浓

8、度的羧甲司坦血浆样品分别置于-70℃冷冻，24h后自然解冻，在拟定分析条件下，测定羧甲司坦的浓度变化，完全解冻后将样品重新冷冻24h。重复6次，观察冻融周期对样品稳定性的影响。结果表明，冻融周期对样品稳定性