hplc-ms-ms法测定人血浆中氨溴索浓度

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1、HPLC-MS/MS法测定人血浆中氨溴索浓度［摘要］目的建立测定人血浆中盐酸氨溴索浓度的液相色谱质谱质谱联用法(HPLC-MS-MS)。方法血浆中加入内标曲马多，经液液萃取后离心，取上清液吹干，再用甲醇复溶。色谱系统：SYMMETRYTMC18柱(150mm×�3.9mm，�5μm)，流动相由20mmol•l-1乙酸铵水溶液∶甲醇(10∶90)组成，流速为0.6ml•min-1。质谱检测方式：多重反应监测(MRM)。用于定量分析的离子对分别为质荷比(m/z)379.0→m/z263.9(氨溴索)和m/z264.2→m/z58.

2、1(内标曲马多)。结果盐酸氨溴索线性范围为0.1~400.0ng•ml-1，最低检测浓度为0.1ng•ml-1；标准曲线相关系数r≥0.99。结论HPLC-MS/MS法具有专属、灵敏、准确、操作简单及快速的优点，可以用于测定人血浆氨溴索浓度。�［关键词］盐酸氨溴索；液相色谱-质谱-质谱法；血浆�［中图分类号］R446.11；R917［文献标识码］A［文章编号］1671-7562(2008)04-0282-03盐酸氨溴索(ambroxolhydrochloride)又名盐酸溴环己胺醇，化学名为反-4-7［(2-氨基-3,5-二溴

3、苯甲基)氨基］环己醇盐酸盐，是溴己新的体内活性代谢物。氨溴索是一种呼吸道润滑祛痰药，能促使呼吸道表面活性物质形成，调节浆液性与黏液性物质的分泌，增加中性黏多糖分泌，减少酸性黏多糖合成，并促进代谢，使呼吸道黏液理化性质趋正常，利于排出［1］。�本实验参考国内外文献［2-3］，以曲马多为内标，旨在建立液相色谱-质谱-质谱联用(HPLC-MS-MS)测定人血浆样品中的氨溴索含量的方法，适用于该药临床口服给药的药代动力学和生物利用度的研究，为临床用药提供参考。�1资料与方法�1.1药品与试剂�氨溴索和曲马多(内标)同为中国生物药品检定所生产，氨溴索批号：20

4、0301，纯度为99.5%；曲马多批号：171242-200302，纯度为97.9%。甲醇为SKChemicals产品，HPLC级；灭菌注射用水为安徽双鹤药业有限责任公司产品；乙醚、二氯甲烷、碳酸钠及乙酸铵均为中国医药(集团)上海化学试剂公司产品，均为分析纯。空白血浆由苏州大学附属第二医院血库提供，于-30℃条件下冷冻保存。�1.2仪器及色谱条件�测定仪器为API-4000三重串联四极杆质谱仪(AppliedBiosystemSciex，USA)，使用Agilent71200高效液相色谱仪、电喷雾离子源(ESI)及Analyst1.42数据处理系统；

5、Drict-Q5超纯水机(Millipore)；VORTEX-2涡旋振荡器；Heraeus低温高速离心机；AS7240B超声波振荡仪；SartoriusBP121S型分析天平和TECHNEDRI-BlockDB-30氮吹仪。�色谱条件：Waters公司SYMMETRYTMC18�(150mm×3.9mm，5μm)色谱柱，PhenomenexSecurityGuardTMC18预柱；流动相由20mmol•l-1乙酸铵水溶液∶甲醇(10∶90)组成；流速为0.6ml•min-1；柱温为25℃；进样量为10μl。�质谱条件：电喷雾离

6、子化源(ESI)；离子喷射电压：5000V；离子源温度：500℃；GS1：45psi；GS2：�35psi；碰撞活化气(CAD)压力：6psi；气帘气(CUR)压力：20psi；扫描方式为多重反应监测(MRM)；氨溴索和内标曲马多的解簇电压(DP)分别为56V和�75V；碰撞能量(CE)分别为30eV和75eV；用于定量分析的离子反应分别为质荷比(m/z)379.0→m/z263.9(氨溴索)和m/z264.2→m/z58.1(内标曲马多)。�1.3血浆样品处理�取血浆样品100μl，加甲醇20μl、内标曲马多标准溶液(20ng•ml-1

7、)50μl、碳酸钠(�0.1mol•l-1)溶液1007μl、提取试剂(乙醚∶二氯甲烷=2∶1，v/v)3ml，涡流混合30s。振荡�2min，离心�5min�(6000r•min-1)，取上清液于30℃下氮气吹干，残余物加150μl甲醇溶解，取10μl进行分析。�2结果�2.1特异性�本试验所采用的HPLC-MS/MS条件，氨溴索保留时间3.28min，内标曲马多保留时间2.97min。氨溴索和曲马多峰形良好，无杂峰干扰，基线平稳。空白血浆中的内源性物质未干扰氨溴索和内标曲马多的测定。图1为氨溴索和内标曲马多的质谱图，图2为

8、血浆中氨溴索和内标曲马多的典型色谱图。2.2线性范围�取空白血浆100μl，依次加入不同浓度的氨溴索标准溶液