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1、HPLC法测定白土茯苓中β【关键词】β-谷甾醇；白土茯苓；高效液相色谱法；含量测定 Abstract：ObjectiveToestablishthemethodtodeterminethecontentofβ-sitosterolinRhizomaHeterosmilacisJaponicae.Methodβ-sitosterolinRhizomaHeterosmilacisJaponicaeinedbyHPLC.ChromatographiccolumnODS-BP5μmcolumn(4.6mm×250mm).Mobilephaseethanol-0.1%H3PO
2、4liquor.Detection.FloL/min.Resultβ-sitosterolshoethodaHeterosmilacisJaponicae. KeyaHeterosmilacisJaponicae；HPLC；contentdetermination 白土茯苓为百合科肖菝葜属植物肖菝葜、短柱肖菝葜、华肖菝葜的干燥块茎。春、秋二季采挖,除去须根及泥沙,洗净,趁鲜切片,晒干。其主要分布于湖南、四川、云南和贵州等地。白土茯苓味甘、淡,性平,主治小便淋涩、白浊、带下、痈肿疮毒。临床多用于治疗筋骨挛痛、瘰疬痈肿、梅毒、钩端螺旋体病。 国内外有关白土茯苓的研究
3、较少。20世纪70年代,曾从白土茯苓中分离得到β-谷甾醇(β-sitosterol)、棕榈酸(palmaiticacid)和硬脂酸(stearicacid)等[1-4]。药理实验表明,β-谷甾醇具有明显的降胆固醇、止咳、抗癌、抗炎等药理作用[5]。目前报道的分析方法有薄层扫描法、气相色谱法、高效液相色谱-紫外检测法、高效液相色谱-ELSD法等[6-8]。本试验对白土茯苓中β-谷甾醇含量进行测定。在选定的色谱条件下,供试溶液中β-谷甾醇与相邻组分分离度良好。经方法学考察,方法的重复性、稳定性、精密度、加样回收率均符合有关规定,可用于该药材的质量控制。 1仪器与试药
4、Aglient1100高效液相色谱仪：AglientG四元泵(Quatpump),AglientG1322A真空在线脱气机(Degrasser),AglientG1313A自动进样器(ALS),AglientG1315DAD二极管阵列检测器,Aglientchimstationsystem(安捷伦化学工作站)；电子天平(德国赛多利斯,BP-211D型)；超声波清洗器(KQ3200DB型,昆山市超声仪器有限公司)。 三氯甲烷(天津市申泰化学试剂有限公司)；无水乙醇(北京化工厂)；甲醇(色谱纯,天津科密欧公司)；磷酸(北京红星化工厂)。β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品
5、检定所,批号11085-200504)；白土茯苓(山西振东药业提供,为贵州省安顺市多个县区,经本院李先荣教授鉴定为百合科肖菝葜属植物短柱肖菝葜)。 2方法与结果 2.1色谱条件 色谱柱：sinachromODS-BP(5μm,4.6mm×250mm)；检测波长210nm；流动相：甲醇-0.1%磷酸(98∶2)；流速：1.0mL/min。理论塔板数均大于3000。色谱图见图1。注：A.β-谷甾醇对照品；B.白土茯苓供试品图1白土茯苓HPLC图谱 2.2对照品溶液的制备 精密称取β-谷甾醇对照品4.4mg,置10mL容量瓶中,加无水乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即
6、得对照品溶液。 2.3供试品溶液的制备 取白土茯苓粉末约5g,精密称定,置于锥形瓶中,加三氯甲烷100mL,浸泡1h,超声处理(功率150L量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)滤过,即得供试品溶液。 2.4线性关系考察 分别精密吸取0.5、1、2、5、10、20μL的对照品溶液,注入液相色谱仪中,按上述色谱条件测定色谱峰面积。以峰面积为纵坐标,对照品质量为横坐标,绘制标准曲线,回归方程为：Y＝29.621X＋2.1807,r＝1.0000。结果显示,进样量在0.22～8.8μg范围内线性关系良好。 2.5精密度试验 取对照品溶液10μ
7、L,在上述色谱条件下重复进样5次,分别测得β-谷甾醇峰面积,结果β-谷甾醇峰面积RSD＝1.03%,表明仪器精密度良好。 2.6稳定性试验 取同一份样品供试液,分别于配置后0、2、5、9、12h进样测定,测得β-谷甾醇含量的RSD＝1.80%,表明供试品溶液在12h内稳定。 2.9样品含量测定 取3批白土茯苓药材样品,按“2.3”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取10μL,按上述色谱条件测定,结果见表2。表2样品含量测定结果 3讨论 本试验采用HPLC法测定白土茯苓中β-谷甾醇的含量,操作在常温下进行,方法灵敏度高,操作简便、快速,为白
