hplc法测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量[1][1].孔改

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1、HPLC法测定降酶片中白藜芦醇和虎杖苷的含量刘德茂1史德胜2（1大连公安医院，辽宁大连1160112天津丹溪国药研究所天津300061）降酶片由虎杖、白花舌蛇草、柴胡、茵陈等中药组成，具有疏肝理气，清热利湿的功效，临床主治慢性肝炎及早期肝硬化。虎杖为其主药之一，白藜芦醇和虎杖苷为其中的主要有效成分，因此可选择白藜芦醇和虎杖苷作为其质量控制的定量指标。本研究建立了HPLC法测定其主要有效成分白藜芦醇和虎杖苷含量的方法。1.仪器与试剂LC—10A型高效液相色谱仪；SPD—10A紫外检测器；Anast

2、ar色谱工作站；乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂为分析纯。虎杖苷对照品（批号11575-200301），白藜芦醇对照品（批号111535-200301）由中国药品生物制品检定所提供。降酶片由本院制剂室提供，批号060820、060821、060822。2.方法与结果2.1色谱分析条件：IrregularC18柱（4.6×250mm5μ）；流动相：乙腈：水（25：75）；流速：1.0ml·min-1；柱温：35℃；检测波长：306nm；进样量：20μl；理论塔板数以虎杖苷峰计不低于3000，以白

3、藜芦醇峰计不低于3000。2.2对照品溶液的制备：精密称取虎杖苷对照品8.04mg、白藜芦醇对照品6.12mg，分别置100ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。各精密量取3ml，分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2.3供试品溶液的制备：取本品20片，研细，取50mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声处理30分钟，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。2.4线性关系考察：分别精密量取虎杖苷对照品储备液1.0ml、2.

4、0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，白藜芦醇对照品储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别吸取20μl进样，记录峰面积。以对照品的浓度为横坐标（X），以相应的峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得回归方程。虎杖苷：Y=38364300X—5194.1，=0.9999，进样浓度在0.00804～0.04020mg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系；白藜芦醇：Y=85777166—2272.48，r=0.9

5、999，进样浓度在0.00612～0.03060mg·ml-1与峰面积呈良好的线性关系。2.5阴性对照试验：按降酶片的处方量制备不含虎杖药材的阴性对照样品，按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，吸取20μl进样，按上述条件测定，结果表明，阴性样品中其他成分对虎杖苷、白藜芦醇色谱无干扰。2.6精密度试验：各取虎杖苷、白藜芦醇对照品溶液，进样20μl，连续进样6次，测定峰面积，结果峰面积RSD分别为0.36%、0.87%。2.7稳定性试验：对同一供试品溶液，按上述色谱条件，于0、2、4、6、8小时

6、进样，测定峰面积。结果溶液8h内稳定，虎杖苷峰面积RSD为0.57%，白藜芦醇峰面积为0.86%。2.8重现性试验：取同一供试品样品平行制备6份供试品溶液，依法检测，测定虎杖苷、白藜芦醇的含量，结果虎杖苷的质量分数为24.22mg/g，RSD=1.05%。白藜芦醇的质量分数为18.61mg/g，RSD=1.42%。2.9回收率试验：采用加样回收法。取已知含量的样品，分别加虎杖苷、白藜芦醇对照品适量，按样品测定项下方法测定虎杖苷、白藜芦醇的含量，计算回收率。结果虎杖苷平均回收率为100.44%，R

7、SD为1.67%；白藜芦醇平均回收率为101.02%，RSD为1.86%（n=6）。2.10样品的测定：将3批样品分别按供试品溶液制备法制成溶液，依上述色谱条件分别进样20μl，以外标法计算样品中虎杖苷、白藜芦醇的含量，结果见表1，色谱图见图1。表1降酶片中虎杖苷含量测定的结果（n=3）Table1AnalysisofcontentofPeceidandResveratolinJiangmeiTablet(n=3)批号虎杖苷的含量(mg·g-1)RSD（%）白藜芦醇的含量（mg·g-1）RSD（

8、%）06082024.251.4918.621.8106082124.481.3218.571.5406082224.231.3019.081.36ABCD图1虎杖苷对照品（A）、白藜芦醇对照品（B）、供试品（C）和阴性对照（D）的色谱图Fig.1HPLCchromatogramsofPeceidreferencesubstance(A),Resveratolreferencesubstance(B),Sample（C）andSamplewithoutPolygonumcuspidatumSie