HPLC法测定竹叶兰根茎中竹

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1、HPLC法测定竹叶兰根茎中竹叶兰烷刘美凤1,2,丁　怡3,杜力军3(1.华南理工大学化工与能源学院,广东广州　510640;2.广州奇星药业有限公司,广东广州　510310;3.清华大学生物科学与技术系,北京　100084)摘　要:目的　利用反相高效液相对竹叶兰干燥根茎中类化学成分竹叶兰烷建立了快速、高效、稳定的分析方法。方法　色谱柱:HypersilODS(150mm×4.6mm,5μm)不锈钢柱,流动相:乙腈-水(35∶65),体积流量:1.0mL/min,柱温:30℃,检测波长:279nm,进样量:10μL。结果　被测定峰与其他色谱峰可达到基线分离,线性范

2、围0.80～2500μg,r=1,回收率及RSD分别为98.20%(RSD=0.66%),102.17%(RSD=0.45%),102.23%(RSD=1.22%)(n=5)。结论　建立了竹叶兰烷的反相高效液相测定方法,本法简便,准确,灵敏度高,可用于定量测定和质量控制。关键词:反相高效液相色谱;竹叶兰;竹叶兰烷中图分类号:R282.6　　　文献标识码:A　　　文章编号:0253-2670(2008)03-0448-02　　竹叶兰Arundinagraminifolia(D.Don)Hochr.为兰科(Orchidaceae)竹叶兰属(ArundinaBl.)植

3、物,别名长杆兰、草姜、山荸荠、竹兰、禾叶竹叶兰、文哈海(傣名),广泛分布于热带和亚热带地区,植物资源丰富,为西双版纳地区傣族人民常用的植物药。其药用部位主要为根茎,用于治疗黄疸,热淋,脚气水肿,疝气腹痛,风湿痹痛,胃痛,尿路感染,毒蛇咬伤,疮痈肿毒,跌打损伤等[1]。初步的活性筛选结果显示,竹叶兰干燥根茎乙醇提取物具有较好抑制肿瘤细胞(Bel-7402和BGC-823)的活性,该提取物中主要为二苯乙烯类化合物,笔者首次对云南产竹叶兰的干燥根茎进行了系统的化学成分研究,从其乙醇提取物中的醋酸乙酯部位分离得到1个新化合物竹叶兰烷(arundinan)[2-(对-羟基

4、苄基)-3-羟基-5-甲氧基联苄][2],该化合物为类化合物,也是竹叶兰中主要的化学成分。本实验建立了HPLC法测定竹叶兰干燥根茎中竹叶兰烷的量,为竹叶兰中类成分的HPLC定量分析工作奠定基础。1　仪器与材料Waters高效液相色谱仪(美国Waters公司,包括515泵,PAD996检测器,7725i进样器),KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。竹叶兰根茎样品采自云南省西双版纳地区(样品编号:001205、010210、02041),经中国科学院昆明植物研究所杨崇仁教授鉴定为A.graminifolia(D.Don)Hochr.。甲醇、乙腈(

5、色谱纯,天津康科德科技有限公司),二次蒸馏水自制,竹叶兰烷对照品自制,HPLC检测质量分数98%以上,其他试剂均为分析纯。2　方法与结果2.1　色谱条件:色谱柱为HypersilODS(150mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-水(35∶65);体积流量:1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL;检测波长:279nm。上述色谱条件下竹叶兰烷的保留时间为7min左右。在该色谱条件下待测组分可达到基线分离,见图1。t/min1-竹叶兰烷1-arundinan图1　竹叶兰烷对照品(A)和竹叶兰干燥根茎(B)的HPLC图Fig.1　HPLCChromat

6、ogramofarundinanreferencesubstance(A)anddriedtuberofA.graminifolia(B)2.2　对照品溶液的制备:精密称取竹叶兰烷对照品适量,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配制成1.0mg/mL的对照品储备溶液。2.3　供试品溶液的制备:竹叶兰干燥根茎粉末(40～60目)200mg,精密称定,置20mL样品瓶中,加甲醇10mL,称定质量,超声提取20min,用甲醇补足清液,0.45μm微孔滤膜滤过,即得。2.4　线性关系考察:精密吸取竹叶兰烷对照品储备溶液适量,加甲醇溶液定量稀释,分别配制成0.08、0.40、2

7、.00、10.00、50.00、250.00μg/mL的对照品溶液,上述溶液按色谱条件测定峰面积,以对照品的质量浓度为横坐标(X),峰面积积分值为纵坐标(Y),进行线性回归,回归方程Y=4556.4X-9517,r=1,线性范围0.80～2500μg。2.5　精密度试验:同一供试品溶液10μL,重复进样5次,测定峰面积,竹叶兰烷峰面积的RSD分别为0.51%。2.6　重现性试验:精密称取同一批竹叶兰干燥根茎粉末样品5份,约0.2g,按2.3项供试品溶液的制备方法制得供试品溶液,进样10μL,测定,测得峰面积,计算竹叶兰烷质量分数为0.18%,RSD为0.87%,

8、表明该方法的重现性良好。