hplc法快速测定竹凉席中的罗丹明b

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1、HPLC法快速测定竹凉席中的罗丹明B　　摘要：建立了快速测定竹凉席中染色剂罗丹明B的含量的方法。以甲醇水溶液超声提取，用高效液相色谱法（荧光检测器）测定，峰面积外标法定量，在优化条件下，罗丹明B的质量浓度在0.5～100.0ng/mL范围内与色谱峰面积呈现良好的线性关系，线性相关系数r=0.9999，检出限为3.0ng/L，加标回收率为87.0%～100.2%，得到罗丹明B的质量浓度和保留时间的相对标准偏差分别为1.24%和0.05%。该方法样品处理简单、快速，适用于竹凉席中罗丹明B的日常检测。　　关键词：罗丹明

2、B；高效液相色谱法；荧光检测器；竹凉席　　中图分类号：O657文献标识码：A　　罗丹明B，又称玫瑰红B，或碱性玫瑰精，俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成染料。罗丹明B在溶液中有强烈的荧光，用作实验室中细胞荧光染色剂及有色玻璃、特色烟花爆竹等行业。本研究建立了一种准确、灵敏的检测竹凉席中的罗丹明B含量的方法，该方法样品前处理简单、罗丹明B的色谱峰形好、定量结果具有很好的重现性、精密度，该方法有着重要的实际应用价值。　　1.试验部分　　1.1仪器和试剂5　　WH-400超声清洗器（济宁万和超声电子设备有限公司）

3、；LC-MS2020液相色谱仪，带荧光检测器，（日本岛津公司）；LP502A型分析天平，感量0.0001g，（常熟市百灵天平仪器有限公司）；中草药粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；标准筛100目；0.45μm有机微孔滤膜；超纯水器（艾柯公司）。　　1.2方法　　1.2.1标准曲线各浓度溶液的配制　　标准溶液的配置：精密称取罗丹明B0.0500g置于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并准确定容至刻度，摇匀，配成质量浓度为0.5mg/mL的罗丹明B标准储备液。标准工作液的配制：用流动相将上述标准液稀释为0.5ng/

4、mL，1.0ng/mL，5.0ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，的工作液。此工作液现配现用。　　1.2.2样品的制备　　取烘干至恒重的竹凉席块切小，放入中草药粉碎机中粉碎，过60目的分子筛，取混合均匀的样品2g，放入100mL的容量瓶中，加色谱纯甲醇至刻度，超声提取30min，静置5min后，取上清液过0.45μm有机微孔滤膜后，用液相色谱仪测定。　　1.2.3色谱分析条件　　色谱柱：C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒度5μm；柱温：35℃。　　进样量：10μL；流速：1.0m

5、L/min；流动相：甲醇和水（比例为60：40）。　　荧光条件：激发波长（Ex）550nm，发射波长（Em）580nm。　　2.结果与讨论　　2.1检测器及检测波长的选择5　　因罗丹明B的甲醇溶液有强烈的荧光，相比紫外检测器，荧光检测器的灵敏度更高，而荧光检测器相比于质谱检测器，价格更优惠，实验室使用更普及些，因此选用荧光检测器作为高效液相的检测器测定罗丹明B；通过对罗丹明B的标准溶液进行光谱扫描可知，罗丹明B在550nm处吸收峰最大，因此将选定为550nm为激发波长（Ex），580nm为发射波长（Em）。　　2

6、.2样品提取条件的选择　　罗丹明B是酸碱两性化合物，易溶于水、甲醇、乙腈等。其中甲醇溶液呈现玫瑰红色，有强烈的荧光，故选用纯的甲醇提出。因罗丹明B是易溶的物质，而且超声提取是最简单快捷的提取方法，所需要时间短，溶剂量少而且提取完全，因此采用超声提取法。超声提取后，样品溶液直接进液相色谱分析，待测组分的损失少，回收率也很高。　　2.3色谱条件的选择　　根据罗丹明B的性质采用反相液相色谱法，C18，（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱进行分离，该色谱柱由于粒径小，比表面积大，柱效显著提高，色谱分析比较理想。流动相

7、选择：分别尝试了不同比例的甲醇-水溶液进行洗脱，并尝试了梯度洗脱方式，发现当甲醇与水的比例为60∶40，进行等度洗脱时，峰形很好，如图1和图2所示，图1为罗丹明B标准色谱图，出峰时间为13.157min。图2为样品的色谱图，出峰时间为13.170min。因此选择了甲醇-水为60∶40的体系作为流动相，等度洗脱方式。　　2.4线性方程及检出限5　　用罗丹明B标准储备溶进行稀释，配置以下浓度的罗丹明B工作液：0.5ng/mL，1.0ng/mL，5.0ng/mL，10ng/mL，50ng/mL，100ng/mL，6个水

8、平的工作液。对每个工作浓度液分别平行测定3次，以罗丹明B标准溶液的质量浓度为横坐标（X），以各个浓度水平的色谱峰峰面积为纵坐标（Y）进行线性拟合。结果表明，罗丹明B标准溶液的质量浓度在0.5～100ng/mL范围内与相应色谱峰峰面积呈现良好的线性关系，线性方程为Y=47540X+6123（r=0.9999）。　　同等色谱条件下进行空白试验，对空白样平行测定10次，计算相应