BJS201905食品中罗丹明B的测定

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1、食品中罗丹明B的测定BJS2019051　范围本方法规定了食品中罗丹明B的液相色谱测定方法及液相色谱-质谱/质谱确证方法。本方法适用于半固态调味料、花椒及花椒粉、花椒油、牛肉干、蜜饯、水果干制品中罗丹明B的测定和确证。2　原理试样中罗丹明B用含酸的甲醇水溶液提取后，经混合型阳离子固相萃取小柱净化，采用液相色谱荧光检测器检测，外标法定量。试样中检出罗丹明B后采用液相色谱质谱/质谱法进行确证。3　试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1　甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.2　乙腈（C2H3N）：色谱纯。3.3　甲酸（CH2O2）

2、：色谱纯。3.4　氨水（NH₃·H₂O）：色谱纯。3.5　含0.1%甲酸的水溶液:取甲酸（3.3）1mL用水稀释至1000mL，用滤膜（0.22μm，水相）过滤后备用。3.6　50%甲醇水溶液:准确量取500mL甲醇（3.1）于1L容量瓶中，用水定容至刻度。3.7　含0.1%甲酸的甲醇水溶液：取1mL甲酸（3.3），用甲醇水溶液（3.6）稀释至1000mL。3.8　含0.1%甲酸的乙腈溶液：取1mL甲酸（3.3），用乙腈（3.2）稀释至1000mL，滤膜（0.22μm，有机相）过滤后备用。3.9　含0.1%甲酸的乙腈水溶液：取0.1mL甲酸（3.3）和35mL乙腈（3.2

3、），用水稀释至100mL，混匀。3.10　含5%氨水的甲醇溶液：取5mL氨水（3.4），用甲醇稀释至100mL，混匀。（临用现配）3.11　罗丹明B标准品：罗丹明B标准品的分子式、相对分子量、英文名称、CAS登录号见表1，纯度≥99%。表1罗丹明B标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量罗丹明BRhodamineB81-88-9C28H31ClN2O3479.011.1　罗丹明B标准储备液：准确称取罗丹明B标准品10mg（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成浓度为

4、100μg/mL的标准储备液。溶液转移至试剂瓶中，置于-18℃避光保存，有效期为6个月。1.2　中间标准溶液：准确移取0.5mL罗丹明B标准储备液（3.12）于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，此溶液的浓度为500ng/mL。置于4℃避光保存，有效期为1个月。1.3　标准工作溶液：用含0.1%甲酸的乙腈水溶液（3.9）将中间标准溶液（3.13）稀释成0.0ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL的标准工作溶液。临用现配。1.4　混合型阳离子固相萃取柱（60mg/

5、3mL）：基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，或相当者。使用前依次用3mL甲醇，3mL水活化。1.5　陶瓷均质子。2　仪器和设备2.1　液相色谱仪：配荧光检测器。2.2　液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。2.3　旋涡混合器。2.4　离心机：转速≥8000r/min。2.5　电子天平：感量分别为0.0001g和0.01g。2.6　具塞离心管：50mL。2.7　组织捣碎机。2.8　固相萃取装置。3　试样制备与保存3.1　半固态调味料取适量样品，捣碎，混匀，常温保存备用。3.2　花椒及花椒粉取适量样品，粉碎后过40目筛，常温保存备用。3.3　花椒油充

6、分混匀，常温保存备用。3.4　牛肉干取适量样品，捣碎，混合均匀，冷藏保存备用。1.1　蜜饯、水果干制品取适量样品，捣碎，混合均匀，冷藏保存备用。2　测定步骤2.1　试样前处理2.1.1　提取：准确称取2g（香辛料样品称取1g，精确至0.01g）试样置于50mL塑料离心管中，准确加入10.0mL含0.1%甲酸的甲醇水溶液（3.7），混匀，加入陶瓷均质子两颗（调味油试样除外），于旋涡混匀器上涡旋15min，于8000r/min离心10min，取3mL提取液层溶液过0.45μm有机相滤膜后待净化。2.1.2　净化：准确移取1.0mL提取液（6.1.1）至固相萃取柱（3.15）中

7、，依次用3mL0.1%甲酸水溶液（3.5）、3mL水、3mL甲醇淋洗固相萃取柱。用6mL氨水甲醇溶液（3.10）洗脱目标物，并收集洗脱液，洗脱溶液在45℃下，用氮气吹至近干，残渣用1.0mL0.1%含酸的乙腈水溶液（3.9）溶解（香辛料样液残渣用0.5mL溶解），过0.22μm有机相滤膜上机测定。2.2　仪器参考条件a)色谱柱：C18柱，4.6mm×100mm，粒径3.5µm，或性能相当者。b)流动相：A为0.1%甲酸水溶液（3.5），B为乙腈（3.2），梯度洗脱程序见表2。c)流速：1.0mL/min。d)柱温：35℃。e)