食品中罗丹明b免疫快速检测技术的研究及应用

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1、密级：学校代码：10075分类号：学号：20131342工程硕士学位论文食品中罗丹明B免疫快速检测技术的研究及应用学位申请人：周丽岩指导教师：王庭欣教授学位类别：工程硕士学科专业：仪器仪表工程授予单位：河北大学答辩日期：二○一五年五月ClassifiedIndex:CODE:10075µ.D.C.:NO:20131342ADissertationfortheDegreeofM.EngineeringResearchandApplicationofDetectionofRhodamineBinfoodsbyR

2、apidImmunoassayCandidate：ZhoµLiyanSµpervisor：Professor.WangTingxinAcademicDegreeAppliedfor：MasterofEngineeringSpecialty：InstrµmentandMeterEngineeringµniversity：HebeiµniversityDateofOralExamination：May,2015河北大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究

3、成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了致谢。作者签名：^响岩曰期：外年〈月>曰学位论文使用授权声明本人完全了解河北大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本学位

4、论文属于1、保密口，在年月日解密后适用本授权声明。2、不保密d。(请在以上相应方格内打“V”)作者签名：、蜀4日期：地年__、月>曰导师签名：农日期：球年》月3_日0n保护知识产权声明本人为申请河北大学学位所提交的题目为（食品中罗丹明B免疫快速检测技术的研究及应用）的学位论文，是我个人在导师（王庭欣）指导并与导师合作下取得的研究成果，研究工作及取得的研究成果是在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助下完成的。本人完全了解并严格遵守中华人民共和国为保护知识产权所制定的各项法律、行政法规以及河北大学的相关

5、规定。本人声明如下：本论文的成果归河北大学所有，未经征得指导教师和河北大学的书面同意和授权，本人保证不以任何形式公开和传播科研成果和科研工作内容。如果违反本声明，本人愿意承担相应法律责任。声明人：闹舶不日期：冰年Y月>日作者签名：同挪絮日期：年导师签名：农日期：>1^年摘要摘要罗丹明B（RhodamineB，RB），俗称花粉红，是一种具有鲜桃红色的人工合成的化工染料，具有致癌致突变作用。因具有价格低廉、色泽红艳、稳定性强等特点，常被不法分子用作辣椒粉、辣椒油及腊肠等调味品的染色剂，给人们的健康乃至社会带来了

6、极大的危害，因此研究食品中罗丹明B的检测方法是迫切需要的。然而目前，检测食品中RB方面的文献至今未见报道，虽然RB被列为卫生部首批公布的17种违禁食品添加物质之一，但仍有违规应用。因此研究RB的快速检测与鉴定方法具有重大意义。由于RB的化学结构不易合成人工抗原，本文通过采用RB的同系物罗丹明123（Rhodamine123，R123）合成人工抗原，制备针对RB的多克隆抗体，初步建立了检测RB的间接竞争酶联免疫吸附法（ELISA）和胶体金免疫层析分析法，两种方法都具有良好的特异性和灵敏度。利用戊二醛法将R12

7、3分别与牛血清白蛋白(bovineserµmalbµmin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbµmin,OVA)进行偶联，制备出完全免疫抗原R123-BSA和包被抗原R123-OVA。将免疫原R123-BSA与弗氏佐剂等体积混匀后，采用皮下多点免疫3月龄的新西兰大耳白兔，制备RB的多克隆抗血清。多次免疫后，经测定兔子产生的抗血清效价为1：4000，采用硫酸铵盐析沉淀法纯化制得的兔抗血清，得到特异性的RB多克隆抗体。以纯化的抗体为基础，建立了RB的间接竞争酶联免疫吸附法。实验表明，在0.001ng/ml～100

8、00ng/ml范围内，IC50为3.96ng/ml，IC15达到了0.23ng/ml，对罗丹明6G、苏丹红和胭脂红的交叉反应率分别为55.93%、8.82%和0.51%，表明此方法具有较高的特异性，并对方法的精密度、灵敏度等进行了评价。在样品的实际检测中，分别对枸杞、辣椒、花椒进行了检测，消除了基质影响，样品回收率测定为80.50%-110.50%，并通过高压液相色谱法（HPLC）对所建立的ELISA方法进行了比