天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究.doc

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1、天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究作者：李映红吴正治吴伟康李明张晓丽陈茵杨敏【摘要】目的：探讨天然脑活素对人胚肺二倍体成纤维细胞增殖能力和复制性衰老的影响及其机理。方法：光镜下观察MRC-5细胞衰老表型，常规计数细胞代龄、传代速度，MTT法检测细胞增殖活度，X-Gal染色法观察细胞衰老情况，计数衰老细胞百分率。结果：天然脑活素可维持细胞的非衰老表型，增加MRC-5细胞代龄，天然脑活素孵育MRC-5细胞的细胞增殖能力较空白老龄对照组明显升高，细胞的增殖速度显著加快。另外，天然脑活素连续培养的细胞在老龄阶段衰老细胞数显著低于老龄对照细胞。结论：天然脑活素可升高MRC-5细胞增殖能

2、力，有效延缓细胞的复制性衰老。【关键词】天然脑活素；人胚肺成纤维细胞；增殖活度；复制性衰老；延缓〔Abstract)0bjectiveToexploretheeffectsofNaturalCerebrolysinoncellproliferationactivityandreplicativesenescyoniclungdiploid5cells)anditsmenceofhumanembrfibroblasts(MRC~echanism.MethodsToobservethechangesofsenescentphenotypebylightmicroscope,countth

3、epassageagesandvelocity,detectthe)potentialofcellproliferationbyMTT.ThechangesofcellssenescenceofNaturalCerebrolysin-effectedMRC-5cellswerestudiedbyX-Galstainingmethod,andthepositivecel1ratesofsenesceneecellsweredetectedandanalyzed..ResultsNaturalCerebrolysinmaintainedunalteredcellmorphologyand

4、increasedlifespanofMRC-5byatleast18~21passages.Comparingwiththecontrolseniumcells,theproliferationpotentialofMRC-5cellsincubatedwithNaturalCerebrolysinwasincreasedobviously(P〔KeyWords)NaturalCerebrolysin；Humanembryoniclungdiploidfibroblasts；Proliferationactivity；Delay；Replicativesenescence衰老是细胞

5、的重要生命现象之一，绝大多数正常细胞被认为仅有有限的分裂能力，当其经过一定的倍增之后，将进入终末增殖状态，称为细胞衰老。一般来讲，人类胚胎的成纤维细胞在迗到衰老时，能够复制50代左右，由于这种衰老是由分裂传代而达到的，故又称之为复制性衰老［1］。探讨细胞衰老的分子机理是人类认识自我研究的重要组成部分，从分子水平研究衰老过程中基因及调控变化，已成为目前衰老机理研究的主要方向，同时研究开发延缓衰老的药物将为提高人类生存质量提供重要保证，也为衰老相关疾病的防治提供理论基础和实验依据。天然脑活素为结合临床经验和现代药效学正交实验优化筛选而成，本研究在以往基础上以人胚肺二倍体成纤维细胞为研究对

6、象，观察了天然脑活素对MRC-5细胞表型、细胞代龄、传代速度、细胞生长增殖能力及衰老相关指标的影响，旨在探讨其延缓MRC-5细胞复制性衰老的作用及其机理。1材料与方法材料细胞株与动物MRC-5细胞是人胚肺成纤维细胞，由美国ATCC细胞库提供，并规定28代及以下为年轻细胞，50代及以上为老年细胞，采用含10%胎牛血清的EMEM培养液培养。新西兰家兔，雄性，体重kg，购自广东省医学实验动物中心，经1周的适应性饲养之后进行实验。药品及试剂研究用药天然脑活素由深圳市中西医结合临床研究所进行生药鉴定并由西安杨森制药厂制备成临床安全级粉剂，纯度为98%。胎牛血清、EMEM培养基购自美国Gibco

7、公司。MTT购自Sigma公司。P-半乳糖苷酶细胞化学染色试剂盒购自美国KPL公司。其他试剂均为国产分析纯级。主要仪器BI0-RAD680型酶联免疫检测仪，LEicaDM16000B型图象分析系统，SANY0MC0-15AC型二氧化碳培养箱。方法实验分组共分5组，年轻对照组；空白老龄对照组；天然脑活素低剂量组；天然脑活素中剂量组；天然脑活素高剂量组，年轻对照组和空白老龄对照组以含10%正常空白血清的EMEM培养，天然脑活素低、中、高剂量组分别以含％、5%、