天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究论文

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1、天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究论文李映红吴正治吴伟康李明张晓丽陈茵杨敏【摘要】目的：探讨天然脑活素对人胚肺二倍体成纤维细胞（MRC-5）增殖能力和复制性衰老的影响及其机理。方法：光镜下观察MRC-5细胞衰老表型，常规计数细胞代龄、传代速度，MTT法检测细胞增殖活度，X-Gal染色法观察细胞衰老情况，计数衰老细胞百分率。结果：天然脑活素可维持细胞的非衰老表型，增加MRC-5细胞代龄，天然脑活素孵育MRC-5细胞的细胞增殖能力较空白老龄对照组明显升高（P＜0.05），细胞的增殖速度显著加快。另外.freelanembryoniclungdiploidfibroblas

2、ts(MRC-5cells)anditsmechanism.MethodsToobservethechangesofsenescentphenotypebylightmicroscope,countthepassageagesandvelocity,detectthepotentialofcellproliferationbyMTT.ThechangesofcellssenescenceofNaturalCerebrolysin-effectedMRC-5cellsethod,andthepositivecellratesofsenescencecellsaintainedu

3、nalteredcellmorphologyandincreasedlifespanofMRC-5byatleast18-21passages.paringcells,theproliferationpotentialofMRC-5cellsincubatedcells(P0.01).Inaddition,thepositivecellrateofsenescencecellsultigenerationcultureinNaturalCerebrolysinthanthoseofcontrolseniumcells(P0.01),andsimilartothoseofyou

4、ngcells.ConclusionAsaresult,otetheproliferationactivityofMRC-5cellsanddelaythecellsreplicativesenescenceefficiently.〔KeyRC-5）为研究对象，观察了天然脑活素对MRC-5细胞表型、细胞代龄、传代速度、细胞生长增殖能力及衰老相关指标的影响，旨在探讨其延缓MRC-5细胞复制性衰老的作用及其机理。1材料与方法1.1材料1.1.1细胞株与动物MRC-5细胞是人胚肺成纤维细胞，由美国ATCC细胞库提供（ATCCNo:CCL-171），并规定28代及以下为年轻细胞，50

5、代及以上为老年细胞，采用含10%胎牛血清（FBS）的EMEM培养液培养。新西兰家兔，雄性，体重（1.5±0.2）kg，购自广东省医学实验动物中心，经1周的适应性饲养之后进行实验。1.1.2药品及试剂研究用药天然脑活素由深圳市中西医结合临床研究所进行生药鉴定并由西安杨森制药厂制备成临床安全级粉剂，纯度为98%。胎牛血清、EMEM培养基购自美国Gibco公司。MTT购自Sigma公司。β-半乳糖苷酶细胞化学染色试剂盒购自美国KPL公司。其他试剂均为国产分析纯级。1.1.3主要仪器BIO-RAD680型酶联免疫检测仪（USA），LeicaDM16000B型图象分析系统（German

6、y），SANYOMCO-15AC型二氧化碳培养箱（Japan）。1.2方法1.2.1实验分组共分5组，年轻对照组；空白老龄对照组；天然脑活素低剂量组；天然脑活素中剂量组；天然脑活素高剂量组，年轻对照组和空白老龄对照组以含10%正常空白血清的EMEM培养，天然脑活素低、中、高剂量组分别以含2.5%、5%、10%天然脑活素含药血清的EMEM培养液培养，血清含量不足10%的用正常空白血清补充。1.2.2实验含药血清的制备含药血清的制备：将雄性新西兰家兔随机分为天然脑活素灌胃组、空白对照灌胃组，每组6只，根据成人治疗量换算为家兔用量灌胃。每个家兔每天灌药量相当于上述配成的成药液2~3

7、mL。连续灌胃1个月，末次给药后2h内后行颈动脉采血，离心分离血清，无菌过滤，56℃灭活补体，即为含药血清，10mL分装后-70℃保存备用。正常对照空白血清的制取是在灌胃相同体积的生理盐水及相同的时间后，用同样方式提取分离保存。1.2.3细胞培养人胚肺二倍体成纤维细胞MRC-5采用加入双抗的含10%胎牛血清（FBS）的EMEM培养液培养，在饱和湿度、37℃、5%CO2常规培养条件下培养，当细胞融合度约90%时，按照1:3或1:4传代。1.2.4细胞计数和细胞形态学检查从第30代起，天然脑活素低、中、高剂