蜂斗菜素抗神经母细胞瘤细胞增殖作用的分子机制研究

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1、AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterstudyonmolecularmechanismoftheanti—tumoreffectofpetasinonneuroblastomaByMingyangWangSupervisor：Prof．QiZhangMasterofPharmacySchoolofPharmaceuticalScienceApril2014原创性声明IUllIIIIIIIIIIIIIIIIUIY2545042本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研

2、究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：沙f5cj年』月多日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后

3、发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：沙f仁年≤月摘要近年来，从天然产物中寻找有效的抗肿瘤活性成分不仅是肿瘤治疗的研究热点，而且也是当前药物界研究的热点。蜂斗菜素是菊科蜂斗菜属植物的有效活性成分之一。我们课题组在之前的研究中发现，蜂斗菜素对神经母细胞瘤SK-N．SH细胞系的增殖有很高的抑制活性，对SH．SY5Y细胞系也有一定的增殖抑制活性。初步研究提示，蜂斗菜素对两种细胞增殖抑制作用的分子机制并不相同。本研究着重于探讨蜂斗菜素在两种神经母细胞瘤细胞中发挥作用的分子靶点，为阐明蜂

4、斗菜素抗肿瘤作用的分子机制提供一定的实验依据。本研究利用基因芯片技术检测蜂斗菜素作用后SK-N．SH和SH．SY5Y细胞中整体基因的表达变化情况；利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术进行基因芯片结果的验证；之后对筛选出的肿瘤相关基因egrl、ctgf春ogadd45a等进行定量检测，从基因水平进一步推断蜂斗菜素作用的分子靶点及可能机制。结果显示，O．8gmol·L以的蜂斗菜素作用于SK-N．SH细胞8h后，实验组与对照组细胞相比得到显著差异表达基因15条，其中10条基因表达明显上调，5条基因表达明显下调；50pmol·L。1的蜂斗菜素作用于SH—SY5Y细胞8h后，实

5、验组与对照组细胞相比得到显著差异表达基因90条，其中表达明显上调的基因有48条，表达明显下调的基因有42条。采用RT-qPCR技术对基因芯片结果进行验证，证实了基因芯片结果的可靠性。从基因芯片结果中筛选出肿瘤相关的差异表达基因egrl、ctgf和gadd45a，进一步检测在蜂斗菜素作用不同时间后，SK-N．SH细胞和SH．SY5Y细胞中此3个基因的表达变化情况。结果发现，蜂斗菜素均能瞬时上调egrl基因的表达，随着作用时间的延长，在SK-N．SH细胞中，蜂斗菜素的作用逆转为抑制egrl基因的表达，而在SH．SY5Y细胞中，其表达水平则恢复至正常；对于cⅣ基因来说，蜂斗菜素作用

6、8h后可引起其在SK．N．SH细胞中表达水平下调，而在SH．SY5Y细胞中由于该基因表达量相对较低而未检测到；蜂斗菜素作用过程中，gadd45a基因在SK-N．SH细胞中的表达均较稳定，不受药物影响，相反，在SH—SY5Y细胞中，其表达量则在蜂斗菜素作用4h后持续升高。综上所述，蜂斗菜素作用后，SK-N—SH细胞及SH—SY5Y细胞中均涉及多种T摘要类型基因的表达变化，这些表达变化显著的基因包括抑癌基因、细胞周期蛋白基因、生长因子及其受体基因、信号传导相关基因、转录调节因子基因、细胞代谢调节相关基因和细胞死亡相关基因等。蜂斗菜素对SK-N．SH细胞的增殖抑制及周期阻滞作用可能

7、与其调控egrl基因及／或ctgf基因相关信号转导通路有关。另一方面，蜂斗菜素可能通过直接或间接诱导gadd45a基因的表达进而引起细胞凋亡使SH．SY5Y细胞的增殖被抑制。关键词：基因芯片蜂斗菜素神经母细胞瘤细胞增殖抑制分子机制RT-qPCRAbstractAbstractScanningeffectiveanti-tumorcompoundsfromnaturalproductshasbeenaresearchfocusintumortreatment，andalsoahotareaincurren