天花粉蛋白抑制hela细胞增殖的实验研究.doc

《天花粉蛋白抑制hela细胞增殖的实验研究.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研宄作者：黄益玲，黄利鸣，惠燕，鲁华【关键词】天花粉蛋白；，，HeLa细胞；，，细胞凋亡摘要：目的研究天花粉蛋白（TCS）对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用，探讨TCS抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法检测TCS对Hela细胞的抑制作用，形态学观察、DNA电泳及流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞的诱导凋亡作用。结果TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用，显微镜下可见细胞圆缩，胞浆凝聚等凋亡细胞的形态学改变，DNA凝胶电泳呈梯级格局，流式检测出现凋亡峰，凋亡比例具有剂量和

2、时间依赖性。结论天花粉蛋白通过诱导细胞发生凋亡而抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖。关键词：天花粉蛋白；HeLa细胞；细胞凋亡ExperimentalStudyofTrichosanthin1sEffectonctiveTostudytheinhchosanthin(Tcs)oni-tumorTheantiprolCSonHelacellswasme.Lightmicroscopywaorphologychanges,DoresisandFCManalysHelaCellsProliferationAbstract:O

3、bjeibitoryeffectoftriHelacellsanditsantiferativeeffectofTasuredwithMTTassaysusedtoobservethemNAagaroseelectrophiswerecarriedouttoexaminetheinducedproliferationofHeLacellswassignificantlyinhibitedbyTCS,Helacellsshowedaserialofcharacteristicchangesofapoptosissu

4、chascellvolumeshrinkage,chromatincondensation；theoccurrenceofDNAladderandapoptosisrateofHelacellswasdoseandtimedependent.ConclusionTrichosanthincaninhibittheproliferationofHelacellsbyitsinductionofapoptosis.Keywords:Trichosanthin；Helacell；Proliferation宫颈癌是导致妇

5、女死亡的第二大原因，严重威胁女性身体健康。天花粉蛋白是从葫芦科植物栝楼的块根中提取出来的一种单链核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingprotEin,RIP),具有多种生物学效应，主要包括免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等作用［1］。目前，TCS的抗肿瘤研究主要集中在绒毛膜上皮癌、胃肠道肿瘤和白血病等方面［2〜3］。本实验研究TCS对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用，并从诱导细胞凋亡的角度探讨其抗癌作用，为药物的进一步研究开发提供实验依据。1材料与方法试剂MEM培养基和胎牛血清购自美国GIBCOBR

6、L公司，碘化丙啶及RNaseA(RNA酶)为Simga公司产品，噻唑蓝(MTT)购自Amresco公司。二甲基亚讽(DMSO)购自Fluka公司，TCS购自上海金山制药厂。细胞培养人宫颈癌HeLa细胞为本室传代保存，培养于5%C02,37°C湿化孵箱中。培养基MEM含10%FBS，U/L青霉素，U/L链霉素，取对数生长期细胞待用。细胞生长抑制实验采用噻唑蓝(MTT)还原法进行检测：将Hela细胞接种于96孔细胞培养板内(每孔的细胞数为2X104个)，细胞贴壁后对照组换新鲜培养基，实验组换用含有不同浓度TCS的培养

7、基，置C02培养箱内分别培养24，48,72h,去上清，加入MTT溶液200ul/孔，置C02培养箱内培养4h，去上清，每孔加入200u1DMSO,轻度振荡后，测定570nm处光吸收值。取8孔吸收值平均数，按公式细胞抑制率(%)=(1_实验组平均吸光度值/对照组平均吸光度值)X100%计算药物对细胞生长的抑制作用。细胞凋亡的检测细胞形态学观察将处于指数生长期的Hela细胞以不同浓度的TCS处理后，倒置显微镜下观察Hela细胞的形态改变。DNA琼脂糖凝胶电泳胰蛋白酶消化收获实验组及对照细胞，1000r/min离心5

8、min,PBS清洗细胞两遍，NP40溶液作用细胞沉淀，加入SDS（终浓度1%）及RNase（终浓度2ug/u1）56°C处理2h，蛋白酶K（终浓度2pg/pl）37°C作用3〜5h，加入1/10体积的3M醋酸钠及2倍体积的无水乙醇，轻轻振摇后置于-70°C冰箱中过夜，14000r/min离心15min,弃上清，用冰冷的70°/。乙醇漂洗，％琼脂糖凝胶30V电泳3〜5h，紫