送检病料圆环病毒pcr检测与流行病学调查结题报告

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1、附件3项目类别项H批准号华糸农涞大嗲大学生科技创新活动项目结题书项口名称，送检病料岗环病毒PCR检测与流行病学调杳申请人：李培龙所在院部：兽医学院专业年级：动物医学2002级联系电话：指导教师：黄毓茂职称副教授立项日期：二◦◦年月日结题u期：二oo年nu华南农业大学大学生科技创新活动项目指导中心填表说明一、填写结题报告书前，请先咨询指导教师或有关专业教师。屮请书的各项内容要求实事求是，逐条认真填写。表达明确、严谨，一律要求用打印稿件。二、申请书为A4复印纸，于左侧装订成册。一式三份（至少一份原件），由指导教师和所在院（部）审查并签署意见后报

2、大学生科技创新活动项目指导中心。三、一级标题三号宋体加粗，用“一、二、三”标示；二级标题四号楷体加粗，用“（一）（二）（三）”标示；三级标题四号仿宋加粗，用“1、2、3”标示；叫级标题叫号仿宋，用“①②③”标示。示例：一、《X）（XX》课题立项与研究的目的意义（-）《XXXX》课题立项与研究的目的的意义1、《XXXX》课题立项与研究的目的意义①《XXXX》课题立项与研究的0的意义四、如表格不够，可以加附页。一、简表项H简况称名M项杳调学病行流与测检RPC毒病环圆料病检送别类R项类科理fB7类科文A费经请中元OO211月年h月5年06O21月

3、6年5002项n组成名姓性别月级r£业专级年職g综分年评学测上合项H中的分工字签人本龙培男8年月891X02205擘5類级动兽医学院372.责负指导教师情况茂毓黄名姓男别1JB1社S授教V.IJ向方究研等治防与断诊的病1豕称名课授等学愈^二分学病染传畜a-猪1员I环摘涛(Porcinecircovirus，PCV)属丁’I环晌涛科环姨涛属。足动物晌毒中最小的一员。该病毒可长期持续污染PK-15细胞，不出现巨细胞祸靑细胞病变(CPE)。临床上，PCV-2对猪有致病性，足断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原体，PCV-I对猪无致病性

4、。M前，由PCV-2引起的PMWS的流行已呈世界性的，全世界养猪业因PMWS而造成的经济损失已不可估朵。北美的加拿人和美国，欧洲的两班牙、英、法、徳、川麦、奥地利，亚洲的F1本、泰国、韩国和台湾竹等一些国家和地区都先后报道了PMWS的发牛.，并从病料中分离到PCV-2(DaftBetal,1996；EllisJetal,1998；Mankertzetal,1999；OnukiAetal,1999)。朗洪武等于1999年7刀，从北京、河北某些猪场疑似PMWS的病猪分离到2株病崔。经电镜观察、间接免疫荧光试验、PCK试验鉴定为PCV-2,首次证

5、明了PMWS在中国大陆的存在。到现在为止，从海南省到黑龙江省，中岡的人部分竹份和地区都报道了PMWS的发屯，外从病料屮分离到PCV-2,这一切都说明国内猪群PCV-2的感染程度也相当严重。本项目即是对广东、广西地区菜些猪场送检的疑似PMWS的病死猪进行PCR诊断，统计分析广东广两地区PCV-2的感染情况，卯且分离出PCV-2,对其进行PCR扩增、克隆其0RF2难因段，和Genbank中发表的国内外PCV-2参考谛株进行核卄酸同源性比较，分析核卄酸序列的差异，在分子水平上对PCV-2的发生和发展规律进行初步研究和探讨。二、项目研究的内容与方法

6、项H研究内界：送检病料圆环病毒PCR检测与流行病学调杏基本实验方法：第一部分：II型圆环病毒(PCV-2)PCR诊断方法的逑立与流行病学调杏分析1.引物设计：根裾0KF-2进行引物设计，并由上海博亚生物技水公司合成。2.病料收集与抽提DNA:收集病料，研磨，用试剂盒抽提DNA。3.PCR：PCR条件优化。4.电泳分析：加样电泳后观察结果。5流行病学调查分析；数据统计，对所有调查结果进行分析总结。完成流行病学调查并保存PCV阳性的病料。第二部分：PCV-20KF2基因段的克隆和测序6.PCR产物的卜

7、收与纯化。7.PCR产物纯化A与PMD18

8、-T载体连接8.连接产物转化DH5a感受态细胞。9.提取東组质粒DNA。10.对重组质粒进行PCR鉴定。11.测序三、项目研究过程与资料查阅情况项目研究过程：本项n从广尔、广西地区部分猪场送检的病死猪提取病料，然后采取pcr方法进行诊断，记录检测结果，冉进行流行病学调查分析。然后对保存的PCV-2阳忡病料的DNA进行PCR扩增，并兑隆其0RF2®因，敁后对所提重组质粒进行PCR鉴定，将鉴定为阳性的秉组质粒送上海博亚公司进行测序。资料査阅情况：[1]粱红虎，罗满林，刘镇明等.2003.猪圆环病毒2型的一种PCR检测方法[J].平南农业大学学报

9、(自然科学版).24(3):91—92[2]王忠田,杨汉春，郭鑫.2002.规模化猪场猪圆环病毒2型感染的流行病学调查[J].中国兽医杂志.38(10)：3-5[1]朗洪武，张广