猪圆环病毒pcr检测方法的优化

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1、第21卷4期中国病毒学21（4）：405-4072006年7月VIROLOGICASINICAJuly2006猪圆环病毒PCR检测方法的优化1,22**2122董志强，张志，李晓成，陈德坤，张燕霞，黄保续（1.西北农林科技大学,陕西杨凌712100；2.农业部动物检疫所,山东青岛266032）OptimizationofPCRfortheDetectionofPorcineCircovirus21,22**21DONGZhi-qiang，ZHANGZhi，LIXiao-cheng，CHENDe-kun，22ZHANGYan-xia，HUANGBao-xu(1.North-westSci-T

2、echUniversityofAgricultureandForestry，Yangling712100,China；2.NationalAnimalQuarantineInstituteofMinistryofAgriculture,Qingdao266032,China)Abstract：ThreepairsofprimersP1/P2,P3/P4andP5/P6ofporcinecircovirus2weredesignedandsynthesizedtocomparethesensitivityandspecializationtoamplifyproductsof404bp,64

3、7bpand1773-6-5bp.OptimumdilutionofPK15cellgenomeinfectedwithPCV2wasachievedwith10ng,10ngtoyieldfromthethreepairsofprimers.ItwasalsoconfirmedthatP1/P2were68.4%successfulindetectingPCV2in57swinesamplesfromtheprovinceofFujian,Theotherprimers,P3/P4,P5/P6,wereonly57.9%and8.7%successful,respectively.Wec

4、oncludethatp1/p2istheoptimumprimerpairforsurveyingincidentsofPCV2inpigs.Keywords：Porcinecircovirus;PCR;Detection;Optimization关键词：圆环病毒；PCR；检测方法；优化中图分类号：S852.65文献标识码：A文章编号：1003-5125(2006)04-0405-03猪圆环病毒(Porcinecircovirus，PCV)为无囊为此，国内外开展了大量相关研究，建立了病膜的单股负链DNA病毒，是目前发现的最小的动毒分离、免疫荧光法、ELISA方法、免疫组化法[1]物病毒，

5、大小约为17nm。PCV根据抗原性及基等方法，以及多种检测PCV2的PCR方法，如竞争[4~10]因组的不同可以分为PCV1和PCV2两种基因型，PCR、套式PCR和实时荧光PCR等。与传统PCV1分离自猪肾细胞系PK15，它不致病，能够方法相比，PCR具有较高的敏感性和特异性。在这在PK15中稳定存在而不形成细胞病变；PCV2对些PCR方法中，普通的PCR方法仍然是最常见和猪有致病性，可引起猪断奶后多系统衰竭综合征最普遍运用的诊断方法。然而，由于不同的引物之(PMWS)、猪皮炎与肾病综合征(PDNS)、断奶猪和间差别较大，使得PCR方法的特异性和敏感性各不育肥猪的呼吸道疾病、猪的繁殖障碍

6、等疾病。近年相同，因此用于诊断时往往容易出现假阴性的结来已成为严重危害我国养猪业的主要疾病之一。但果。本文针对最常见的三种扩增PCV2的引物区域迄今为止市场上还没有商品化疫苗和特效药物防设计和比较了3对引物的特异性和敏感性，优化了治该病，并且该病有时呈亚临床感染，所以做好该PCV2的PCR诊断方法，这将有助于我国猪群病的诊断显得尤为重要。PCV2疫情的监测，也能为控制该病的传播提供技PCV1基因组全长1759bp，PCV2基因组全术支持。[2，3]长1767bp或1768bp。序列比较表明PCV1与1材料和方法PCV2之间的核酸同源性只有68％，而不同PCV2[3]毒株之间的同源性均为96

7、％以上。由于PCV1和1.1实验材料PCV2均不产生细胞病变，因此迫切需要建立一种试验所用的样品来自福建省57个猪场发病猪的肺既敏感又特异的检测PCV2的方法。脏和淋巴结。EcoliDH5α由本实验室保存，DNAZol收稿日期：2005-11-19修回日期：2006-02-16作者简介：董志强（1980-），男，硕士研究生，研究方向为分子病原学与免疫学。**通讯作者.Correspondinganthor.Tel:053