严重急性呼吸综合征(sars)病人血清抗体水平的初步探讨

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1、严重急性呼吸综合征(SARS)病人血清抗体水平的初步探讨-->　　摘要:为了了解严重急性呼吸综合征(SARS)病人血清中的抗体产生规律,对56份病人血清和36份健康人血清,分别采用间接酶联免疫吸附试验(EIA)检测IgG抗体和捕获法检测IgM抗体。结果显示:56份病人血清中有48份IgG抗体阳性,7份IgM抗体阳性。　　关键词:严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒IgG抗体IgM抗体APreliminaryStudyofSerumAntibodyLevelinSARSPatientsAbstract:Tou

2、nderstandtheregularpatternofantibodydevelopmentinseraofSARSpatients,56serumsamplesfromSARSpatientsand36fromhealthypersonsethodsofEIAandcaptureELISAGastroenterology/respectively.Theresultsrevealedthat48ofthe56samplestestedsamplese,SARS)病人,截至目前为止,中国(包括香港特别行政区

3、)共有5049例病人,全世界共有5663例病人,死亡372例[1]。病人的主要症状为高烧,咳嗽,肺部有阴影,严重的有呼吸急迫,甚至死亡。现在世界卫生组织已确定新型的、变异的冠状病毒为此次SARS的病原。冠状病毒有3个结构蛋白:E2,即突起子糖蛋白;E1,即M蛋白;N蛋白。E2蛋白功能是与细胞受体相作用,引起细胞融合,刺激产生中和抗体和细胞介导的细胞毒[2]。本文以E2蛋白为抗原,采用间接酶联免疫吸附试验检测血清中的IgG抗体和捕获法检测血清中的IgM抗体,以探讨SARS病人血清中抗体产生的规律。　　材料与方法

4、1　血清　广州市疾病预防控制中心采自各医院SARS病人的血清56份,阴性血清为1996年采自河北健康人的血清36份。　　2　抗原及酶标抗原　E2蛋白及HRP-E2蛋白。　　3　间接酶联免疫吸附试验(EIA)测血清中的IgG抗体[3]　　E2蛋白用包被液以1∶500稀释,酶标板每孔100μl,37℃温箱孵育1.5h;用清水洗1遍,0.5%BSA封闭液封闭1h;洗3遍,病人血清及健康人血清1∶20稀释,每孔100μl,37℃温箱孵育30min;洗3遍,HRP标记的抗人IgG为二抗,以1∶1000稀释,每孔100μ

5、l,37℃温箱孵育30min;洗3遍,每孔加A和B液各1滴,室温15min显色,加终止液终止,450nm处测其OD值。　　4　捕获法测血清中IgM抗体[3]　抗μ链抗体1∶200稀释,每孔100μl,37℃温箱孵育1.5h;用清水洗1遍,0.5%BSA封闭液封闭1h;洗3遍,病人血清及健康人血清每孔50μl,37℃温箱孵育30min;洗3遍,HRP标记的E2蛋白以1∶500稀释,每孔50μl,37℃温箱孵育30min;洗3遍,每孔加A和B液各1滴,室温15min显色,加终止液终止,450nm处测其OD值。　　

6、5　结果判定　结果判定以病人血清的OD值大于36份阴性血清平均OD值的2.1倍视为阳性结果。　　结　　果所测的56份病人血清中,48份为IgG抗体阳性,7份IgM抗体阳性,且这7份血清IgG抗体也为阳性。　　讨　　论自从2002年11月份广东佛山出现第一例SARS病人以来,中国乃至世界许多国家都有不同程度的SARS流行。由于其病原是一种新型的变异的冠状病毒,其致病机理目前还尚未清楚。从其氨基酸序列分析,可发现此种冠状病毒E2蛋白主要中和抗原位点与已知冠状病毒变异80%,两个次要中和抗原位点的变异率分别为75%

7、和20%。　　本实验所采集的病人血清的发病天数为定制论文12~58天,抗原为本次SARS的病原体,即新型冠状病毒的E2糖蛋白,即spike蛋白。此蛋白能直接连接宿主细胞受体,产生中和抗体和诱导细胞介导免疫等功能。48份IgG抗体阳性的血清中仅有7份IgM抗体阳性,IgM抗体阳性的病人的发病天数分别为16、18、27、20、35、31、19天,说明SARS病人体内IgM抗体等水平较低,持续时间较短。其原因可能与人群中普遍存在冠状病毒的抗体有关[4]。此新型冠状病毒感染人体后,引起机体的免疫回忆反应,IgM抗体很

8、快产生,但并很快消失。