严重急性呼吸综合征患者血清中sars相关抗体的特异性研究

《严重急性呼吸综合征患者血清中sars相关抗体的特异性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、严重急性呼吸综合征患者血清中SARS相关抗体的特异性研究-->[摘要]目的:检测严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清中SARS相关抗体的抗原特异性。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中IgG抗体,并采用抗原抗体的预孵育,吸附血清中抗原特异性抗体,检测其抗原特异性。结果:SARS患者血清与SARS患者肺组织以及非SARS患者肺组织均有相似的反应性。阳性血清与非SARS患者肺组织孵育后,其中抗SARS患者肺组织抗体被吸收,吸收率为100%。结论:本组SARS患者血清中存在抗肺组织抗体,其对SARS致病机制的意义值得进

2、一步研究。①严重急性呼吸综合征(SARS)是迄今为止已经在30多个国家和地区出现的严重呼吸道传染疾病,具有急性发病、早期出现肺部病变、病死率高等特点,已经成为严重危害人类健康的世界性问题。有报道认为SARS的病原体可能为冠状病毒[1~3]、副粘病毒或衣原体,世界卫生组织(SF,1%NP-40,0.5%去氧胆酸钠)裂解。加入适量的预先混合好的多份正常人血清,4℃过夜,以去除可能与正常人血清反应的肺组织抗原。然后4℃,10000×g离心10min。取上清过滤,去除沉淀备用。1.5肺组织匀浆中残存IgG的清除采用Hitrap-Prot

3、einGHP柱亲和层析法。取组织匀浆,用0.5mol/LNa2HPO4(pH8.0)缓冲液稀释后上柱,按照说明书操作。收集过柱液保存。1.6血清同肺组织反应性检测采用ELISA法将肺组织过柱匀浆按2mg/ml包被聚丙乙烯微孔条,4℃过夜。加0.05%酪蛋白37℃封闭2本论文出自h。洗板5次后,依次加入血清标本(1∶10稀释,37℃孵育1h)和辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG(1∶1000,孵育同上)。洗板5次后加入显色A、B液,置暗处放5min后加入终止液终止。于450nm波长下检测光密度值(D450)。结果判定:(样品D450-

4、本底)/(对照D450-本底)≥2.1为阳性。1.7血清中抗肺组织抗体中和吸收实验将患者血清与正常献血员血清按1∶1比例同非SARS患者肺组织匀浆Hitrap-ProteinGHP柱过柱液混合后,37℃孵育30min,使肺组织充分吸附血清中可能与肺组织反应的抗体。将混合液加入肺组织包被聚丙乙烯微孔条,检测与肺组织的反应性,方法同上。1.8统计学处理配对资料t检验及χ2检验,均采用STATA统计软件。2结果选取与SARS患者肺组织反应阳性的18份SARS患者及13份健康献血员血清,同时选取了16份阴性健康献血员血清标本,与非SAR

5、S肺组织反应,结果见表1。对数据进行χ2检验:χ2=0.5;P=0.4795>0.05,两者间无差异。说明上述血清同两种肺组织抗原的反应性是相似的。将SARS患者血清及正常献血员血清按1∶1比例分别与非SARS患者肺组织匀浆过柱液混合,37℃孵育30min后,再与患者肺组织反应并进行ELISA检测,结果见表2、3。统计学分析表明,两组血清用肺组织吸附前后的D450值的变化均有统计学意义。此外,在与肺组织充分孵育后,无论是献血员血清中,还是SARS患者血清中的抗SARS患者肺组织中抗原的抗体均被非SARS患者肺组织预先所吸收,吸收

6、率为100%。3讨论基于SARS患者血清中存在较高浓度的SARS病原体特异性抗体的推测,我们从免疫学的角度,利用抗原抗体特异性结合的原理,试图利用SARS患者肺组织中存在的病原体抗原捕获到血清中的病原体特异性抗体。实验结果表明,尽管SARS患者血清在与SARS患者肺组织的反应中表现出了较高的阳性率,但是在与作为对照的非SARS肺组织的反应中也出现了相似的结果[4]。这些结果提示:血清中的抗体可能是肺组织特异性的,而非病原特异性的。本研究为了进一步证实这个推测,使用非SARS患者肺组织匀浆预先吸附血清中的肺组织特异性抗体,然后再与

7、SARS患者肺组织反应。实验结果表明所有阳性血清在吸附后都转为了阴性,吸收率为100%。这说明血清中的这种抗体可能主要是肺组织特异性的。这种抗肺抗体的发现,结合SARS迅速发展的病程、严重的肺部体征、以及临床治疗中激素应用的良好疗效都提示:SARS患者的肺部损伤可能是由于病原体感染后引起的机体异常的免疫反应造成的。我们在对临床SARS患者血清中抗肺组织特异性抗体的动态研究中也发现患者血清中可以最早在发病2d后、肺部X线片可见阴影前出现该抗体,而且与激素治疗效果以及病情严重程度有一定相关性[6],这些现象都提示这些肺组织特异性抗体

8、可能参与了SARS感染患者的肺部病理损伤。关于抗肺组织抗体在SARS致病中作用的进一步研究,对于SARS感染的早期诊断,以及指导SARS感染的临床治疗都有重要的意义。理论上讲,SARS患者体内存在抗SARS病原的特异性抗体。目前国内外试剂已相继面世,并在SARS