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《严重急性呼吸综合征患者肺组织包被抗原的特异性研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、严重急性呼吸综合征患者肺组织包被抗原的特异性研究-->[摘要]目的:探讨严重急性呼吸综合征(SARS)肺组织包被抗原在不同个体以及猪、羊、大鼠中的种属特异性。方法:匀浆SARS患者尸检肺组织、非SARS患者肺组织以及猪、羊、大鼠肺组织后分别包被,利用酶联免疫吸附试验(ELISA),同时检测SARS患者及正常献血员血清中的IgG。结果:SARS患者及正常献血员血清用SARS尸检患者与非SARS患者肺组织包被抗原检测,两种组织包被抗原检测的阳性率间无统计学差异;而用非SARS患者肺组织包被抗原检测的阳性率
2、和用羊、猪、大鼠肺组织包被抗原检测的阳性率均具有统计学差异。结论:SARS患者肺组织及非SARS患者肺组织中存在相同的抗原;其他动物中可能也存在该抗原,但可能因为其他抗原干扰而不适于用该方法检测。①严重急性呼吸综合征(SARS),又称为传染性非典型肺炎,具有急性发病、早期出现肺部病变、病死率高等特点,已经成为严重危害人类健康的世界性问题。已有相关报道分离了衣原体、副黏液病毒、冠状病毒,而且目前已确认其致病原为新型冠状病毒[1~3]。基于患者血清中存在病原体特异性抗体的假设,我们对SARS患者恢复期血清
3、进行了一系列研究,发现血清中存在着抗肺组织的相关抗体,并且建立了早期的诊断方法[4,5]。本研究进一步应用不同人(SARS死亡患者肺组织及1例非SARS患者肺组织)及猪、羊、大鼠肺组织,制备匀浆处理后包被,应用ELISA方法检测SARS患者血清中的抗肺组织抗体,以求阐明肺组织中相关抗原的特异性。1材料和方法1.1材料血清标本:选取302医院临床诊断SARS患者血清11份,307医院血站筛查的献血员血清12份。肺组织:SARS患者肺组织1例取自302医院SARS死亡患者尸检标本,非SARS患者肺组织取自
4、301医院手术切除的肺组织标本,猪、羊肺组织购自市场,大鼠肺组织源于302医院动物中心麻醉处死后解剖的肺组织。以上组织均于-80℃保存。Hitrap-ProteinG,购自AmershamPharmaciaBio-science公司。1.2方法1.2.1肺组织匀浆包被液的制备取冰冻肺组织后,加入裂解液(Tris-HCl,Aprotinit,PMSF,SDS等组成),加入适量多份献血员混合血清4℃孵育过夜,4℃10000×g离心10min,取上清,用0.5mol/LNa2HPO4(pH8.0)缓冲液稀释
5、后,按说明书操作上柱,利用Hitrap-ProteinG本论文出自去除肺组织及加入的献血员血清中混杂的人IgG,收集过柱液检测280nm处光密度值(D280),计算蛋白含量备用。SARS患者尸检肺组织、非SARS患者肺组织及动物肺组织均按如上方法制备包被液。1.2.2ELISA检测将上述包被液用50mmol/L碳酸盐缓冲液稀释,1mg/ml包被聚丙乙烯微孔条,4℃过夜;加120μlFCS-PBS37℃封闭2h;依次加入SARS患者及献血员血清(1∶10稀释),37℃孵育1h;加入HRP-羊抗人IgG(
6、1∶1000),孵育同上;最后加入TMB显色液显色15min,于450nm波长下检测光密度值(D450)。结果判定:(样品D450-本底)/(对照D450-本底)>2.1为阳性。应用SAS软件对结果进行统计学分析。2结果2.1SARS患者肺组织及非SARS肺组织包被抗原的特异性比较我们选取了11份SARS患者血清及12份献血员血清对肺组织包被抗原进行ELISA检测,其结果见表1。统计学分析结果表明,SARS患者肺组织与非SARS肺组织包被抗原检测的阳性率(47.8%vs60.9%)间差异不具统计学意义
7、。2.2非SARS肺组织与猪、羊、大鼠肺组织包被抗原的特异性比较选取了5份SARS患者血清及10份献血员血清,分别用非SARS肺组织及猪、羊、大鼠肺组织包被抗原进行ELISA检测,结果见表2~4。统计学分析结果表明,非SARS肺组织与猪、羊、大鼠肺组织包被抗原检测的阳性率差异均具统计学意义。3讨论我们先前的研究工作已经表明SARS患者会产生针对肺组织的自身相关抗体,同时通过多次实验,非SARS患者肺组织吸附阳性患者血清后,该血清与患者肺组织的结合反应被阻断[4],说明该抗体是针对肺组织细胞中的某种或某
8、些成分。基于以上结果我们设计了此次研究,力求阐明SARS患者血清中存在的相关抗体所针对的抗原是否存在个体差异及种属特异性。为此,选取了SARS患者尸检肺组织、非SARS(肺癌)患者手术切除的肺组织以及猪、羊、大鼠肺组织,经匀浆、献血员血清吸附、去除IgG后定量蛋白,同时以1mg/ml包被,检测同样的血清。结果经统计分析,发现SARS患者肺组织与非SARS患者肺组织包被抗原检测的阳性率间不存在差异,因此认为我们检测的SARS相关抗体是广泛的针对肺组织的,并
