三种不同检测方法诊断结核病的比较

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1、三种不同检测方法对诊断结核病的比较池云生张东浩吉林省结核病医院检验科130500【摘耍】目的将诊断结核病的蛋白芯片法与金标法及抗酸染色法三种检测方法进行比较，以评价三种方法在临床中的应用价值。方法用蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检测125例确诊结核病人、50例肺部其它疾病患者和健康体检者的血清标本，并进行相关统计分析。结果蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检出结核分枝杆菌的灵敏度为64%,72%及22.7%,前两者比较无显著性差异(P>0.05),但均高于抗酸染色法(P<0.05)。三者的特异性分别为90%,76.7%及96.

2、7%。结论蛋白芯片法检测结核分枝杆菌，与金标法及抗酸染色法比较，具有简便、快速、敏感性较高和特异性强等优点，是临床辅助诊断结核病的有效方法。【关键词】蛋白芯片；结核分枝杆菌；比较；诊断结核病是严重危害人民群众健康的呼吸道传染病，被列入我国法定重大传染病。为了实现早发现、早诊断、早治疗的目标，临床上现己幵展了多种针对于结核病诊断的实验室检测项目。我院以开展的检测项A有蛋0芯片法、金标法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、结核菌培养等多种方法。根据临床应用情况，现就相对简便易行的蛋白芯片法、金标法、抗酸染色法进行比较，来评价三种

3、方法在临床中的应用价值，以便更好地为结核病防治的临床应用提供及时准确的信息。结核蛋白质芯片(proteinchip,PC)是近年来蛋白质组学研究中兴起的一种新方法，其基本原理是以微孔滤膜为载体，利用微阵列技术将纯化的结核菌脂阿拉伯甘露糖(LAM)、蛋闩16KDa(rT—PA16)和38KDa(rTPA38)等三种抗原固相于同一膜片上，使抗原抗体反应在固相膜上快速进行，再以免疫金作为标记物在膜上显色，然后放入芯片阅读仪，在专门软件的支持下对抗原点阵的灰度值进行分析，以达到检测结核分枝杆菌的H的。为了评价此方法的临床应用价值，

4、本文将此法与免疫胶体金法及常规的抗酸染色法作一比较，现报告如下：1材料与方法1.1材料①标本来源：125例确诊结核病人血清由我院内科肺结核确诊病人提供，50例肺部其它疾病患者和健康体检者的血清来源于木院胸外科、内科和门诊体检人员。②主要仪器和试剂：蛋白芯片阅读仪、结核分枝杆菌蛋白芯片试剂盒均为南京大渊生物技术公司提供：结核分枝杆菌免疫胶体金诊断试剂盒为上海奥普生物医药有限公司产品；抗酸染色相关试剂，根据《全国临床检验操作规程》（第3版）由实验室自行配置。1.2方法1.2.2蛋白芯片法：亦芯片上称记上样rfij编号，亦芯片盒

5、窗口内滴加200p1试剂A，使膜表面完全浸湿；将待检血清100ul加入窗口中，待血清完全渗入后，再滴加300ur试剂B;待试剂B完全渗入后，滴加500ur试剂C;待试剂C完全渗入后，最后滴加300u1试剂D;反应完毕后30min内，将芯片放入芯片识别仪进行结果分析。在确保没有幵启任何应用程序的情况下，把芯片盒内的小光盘放人光驱，机器会自动进入“生物芯片检测软件”，然后按程序操作，并打印出分析结果。结核杆菌3种特异性抗体，即抗脂阿拉伯卄露糖（LAM）、16KDa及38KDa抗体，如果任一抗体检测为阳性，结果则判为阳性。整个操

6、作过程需30min左右。1.2.2金标法（DTGFA）:利用结核杆菌特异性外膜抗原，采用斑点免疫金渗滤试验（DIGFA）原理进行检测，严格按说明书进行操作。1.2.3抗酸染色法（AFS）:参照《全国临床检验操作规程》第3版。1.3统计学分析概率的比较采用X2检验。2结果2.1175例标本三种检测结果与临床诊断的关系见表1。表1175例标本三种检测结果比较分组PC检出率（％）DIGFA检出率（％）AFS检出率（％）结核组12564(80/125)72(90/125)22.7(33/125)对照组5010(5/50)23.3(

7、12/50)3.3(2/50)注：P〈0.05（与对照组比较），P<0.05（与AFS法比较）。2.2三种检测方法的灵敏度、特异性比较蛋白芯片法、金标法及抗酸染色法检出结核分枝杆菌的灵敏度为64%,72%及22.7%,特异性分别为90%,76.7%及96.7%。2.3蛋白芯片法结核病组三种结核茵抗原的抗体构成比三种结核菌抗原的抗体阳性率以抗LAM抗体的阳性率最高，为57.33°%（72/125）,其次为抗38KDa抗体44%（55/125）,最低为抗16KDa抗体20%（25/125）。三种抗体各组合结果见表2。表2结核病

8、组三种结核菌抗原的抗体构成比LAM16KDa38KDan百分比（％）+++1411.2+—+4032+——1512——+——75.6—++10.8++—32.4———45363讨论20世纪90年代以来，随着分子生物学在医学领域取得的飞速发展，研究者也将分子生物学的原理引入了结核试验研宄范围。自1989年