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1、平调饮对原发性肝癌患者AFPmRNA、MAGE原发性肝癌(HepatocellularCarcinoma)是世界十大恶性肿瘤之一,据统计,每年全球新患肝癌人数为62.6万人,因肝癌死亡者高达59.8万人,居死亡原因第3位,而新发肝癌病例中55%发生于中国,我国的肝癌诊治形势十分严峻[1]。手术切除目前仍是肝癌首选的、最有效的治疗方法,但在临床中大多数肝癌患者在确诊时已属中晚期,手术机会多已错过,且放、化疗毒副反应大,疗效较差。中医药作为综合治疗的组成部分,因其能稳定瘤体生长、改善症状体征、提高生存质量、延长生存期,故已被较多患者所
2、接受。平调饮由黄芪、当归、白芍、熟地黄、蚤休等药物组成,是黑龙江中医药大学附属第一医院基于多年临床实践创立的中药复方,在临床应用多年,对瘤体具有明显的抑制作用,并有提高患者生活质量、延长生存期的作用。为阐明其抗肝癌机制及为临床应用提供依据,我们观察了平调饮对肝癌患者甲胎蛋白(AFP)及黑色素瘤抗原-1(MAGE-1)基因表达的影响,现报道如下。 1资料与方法 1.1一般资料 选取2007年10月—2009年10月黑龙江中医药大学附属第一医院住院和门诊原发性肝癌患者60例,随机分为2组。治疗组30例,男17例,女13例,平均年
3、龄55.7岁；对照组30例,男20例,女10例,平均年龄56.7岁。2组患者性别、年龄、病程、病情轻重程度等方面差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。健康组来自门诊体检的健康志愿者,共30例,男性15例,女性15例,平均36.2岁。 1.2诊断标准 符合1999年第四届全国肝癌学术会议提出的原发性肝癌临床诊断标准[2]。病理诊断：肝内或肝外病理学检查证实为原发性肝癌。临床诊断：①AFP＞400?g/L,排除活动性肝病、妊娠、生殖系胚胎源性肿瘤及转移性肝癌,并能触及坚硬及有肿块的肝脏或影像学检查具有肝癌特征性占位性病变者
4、；②AFP≤400?g/L,有2种影像学检查具有肝癌特征性占位性病变或有两种肝癌标志物阳性及一种影像学检查具有肝癌特征性占位性病变者；③有肝癌的临床表现并有肯定的肝外转移病灶(包括肉眼可见的血性腹水或在其中发现癌细胞)并能排除转移性肝癌者。 1.3纳入标准 ①全部病例均经明确的MRI、CT等影像学检查,结合AFP或肝穿刺病理确诊；②患者年龄在18～75岁；③如经手术、放疗、化疗、介入治疗、射频消融等抗肿瘤治疗,已结束1个月以上,而仍有实体瘤者；④卡氏评分60分以上；⑤预计生存期3个月以上；⑥自愿接受临床观察者。 1.4排除标
5、准 ①继发性肝癌；②不符合以上纳入标准者；③合并有严重心脑血管疾病、肾脏疾病、造血系统等原发性疾病以及精神病患者；④正在服用其他中药抗癌制剂或免疫调节剂(生物制剂)的患者；⑤过敏体质或对本制剂过敏者。 1.5治疗方法 治疗组采用常规保肝治疗,同时口服平调饮(黑龙江中医药大学药厂制备),每日早晚各1次,每次150mL。教育核心论文发表 对照组采用常规保肝治疗,同时予华蟾素注射液(批号030301、050515、060120,安徽金蟾生化股份有限公司,皖卫药准字82884号)15mL＋5%葡萄糖溶液250mL静脉滴注,每日1次
6、。 2组均每3周为1个疗程,疗程间休息1周,共治疗2个疗程。治疗中停止使用其他抗癌药物,但允许必要时短时间给予对症或支持治疗。 1.6观察指标与方法 治疗组和对照组患者分别于用药前、用药后抽取周围静脉血液各10mL,健康志愿者抽取一次10mL静脉血,采用常规方法分离单个核细胞,-70℃保存。采用RT-PCR方法对AFPmRNA、MAGE-1mRNA表达进行检测,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),具体方法如下：①采用Trizol法提取标本的总RNA,溶于DEPC处理过的水中。取少量样本行分光光度测定和2%琼脂糖凝胶电泳,以
7、测定其纯度、浓度和完整性。②按照标准流程,单个试剂(M-MLVRT由Promega生产,货号ML701；RnaseInhibitor由宝生物工程有限公司生产,货号D2313A；dNTPMixture由宝生物工程有限公司生产,货号D4030A)逐一完成反转录。MAGE-1mRNA引物1：5’-TCTGTGAGGAGGCAAGGT-3’,引物2：5’-TGATGGTAGTGGGAAAGG-3’；AFPmRNA引物1：5’-GCTGACCTGGCTACCATA-3’,引物2：5’-AACTGTTGCTGCCTTTGT-3’。反转录反应体
8、系为20?L,37℃下扩增60min,95℃下变性5min,4℃保存。聚合酶链反应体系为50?L,94℃下预变性5min,94℃下变性30s,72℃下延伸30s；重复变性、退火、延伸35个循环；72℃下充分延伸10min,结束温度为4℃。取5?L产
