重组人肿瘤坏死因子

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1、重组人肿瘤坏死因子：刘霞，陈元仲，吴勇，黄美娟，杨大柳，郭江睿【摘要】为了研究重组人肿瘤坏死因子-α（rebinanthumantumornecrosisfactor-alpha，rhTNF-α）在体外及体内对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的作用，应用MTT法和集落形成试验测定HL-60细胞的增殖抑制，采用AO/EB荧光染色法、流式细胞术和TdT酶介导的缺口末端标记（TUNEL）法检测凋亡细胞；利用HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型观察给药后瘤体重量、组织病理的改变，并采用透射电镜以及TUNEL法检测瘤组织细胞的凋亡。结果表明：rhTNF-α对HL-60细胞的增

2、殖具有明显的抑制作用，呈时间和浓度依赖性；AO/EB染色后可见rhTNF-α处理组HL-60细胞核内染色质浓缩聚集或成碎片，呈现凋亡表象；流式细胞术显示随着rhTNF-α浓度的增加，细胞凋亡阳性率逐渐增高；TUNEL法检测显示，3200U/mlrhTNF-α作用于HL-60细胞48小时凋亡阳性率可达37.5%。在体内，rhTNF-α可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤生长，抑制率最高可达60.33%；病理检查发现，rhTNF-α处理组的瘤组织有程度不等的出血坏死区域;透射电镜及TUNEL法检测表明，处理组的瘤组织可见有较多凋亡细胞。结论：rhTNF-α在体内、外均

3、可抑制HL-60细胞增殖，并诱导其凋亡。【关键词】重组人肿瘤坏死因子　　EffectsofRebinantHumanTumorNecrosisFactor-alphaonHL-60CellsInVitroandInVivo　　AbstractTostudytheeffectsofrebinanthumantumornecrosisfactor-alpha(rhTNF-α)onHL-60cellsinvitroandinvivo，MTTandcolonyformingassayinetheeffectsofrhTNF-αonproliferationofHL-60

4、cells;AO/EB(acridineorange-ethidiumbromide)staining，Annexin-VfloetryanalysisandTUNELassayorinhibitionrate，histology，ultrastructureandTUNELassay.Theresultsshoanner.Stainingofcellsatincondensationandfragmentation.PositiveAnnexinV-FITConcellmembraneshoanner.TUNELassaysholrhTNF-αfor48hou

5、rs.InvivorhTNF-αinhibitedxenograftgroorsofgroupstreatedoreapoptoticcellsintreatmentgroupsthaninthatcontrolgroupbytransmissionelectronmicroscopy(TEM)andTUNELassay.ItisconcludedthatrhTNF-αisabletoinhibittheproliferationofHL-60cellsandtoinduceapoptosisofHL-60cellsinvitroandinvivo.　　Keyo

6、rnecrosisfactor-alpha，TNF-α）是一种多效应的细胞因子，具有抗肿瘤、抗感染和调节机体免疫等功能，其抗肿瘤作用一直备受关注。有关TNF-α的抗肿瘤作用侧重于对黑色素瘤、肺癌、肝癌、鼻咽癌、喉癌等，而对白血病的作用研究较少。我们前期的研究发现，在三氧化二砷（As2O3）诱导HL-60细胞凋亡过程中伴有内源性TNF-α表达增强，而TNF-α反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸能够抑制As2O3诱导细胞凋亡［1］，提示内源性TNF-α在HL-60细胞凋亡过程中的起驱动作用。已知外源性TNF-α在体外可以诱导HL-60细胞凋亡［2］，而其在体内对HL-60细胞

7、的作用，目前仍未见有报道。本实验采用重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α），研究其在体外对HL-60细胞的作用，进一步通过HL-60细胞裸鼠移植瘤模型，研究其在体内对HL-60细胞裸鼠移植瘤的作用。　　材料和方法　　细胞培养　　人髓系白血病细胞株HL-60，由武汉中国典型培养物保藏中心引进。置于含10%的胎牛血清（杭州四季青生物制品研究所）的RPMI1640（Gibco-BRL）培养液中，在37℃、饱和湿度、5%的CO2培养箱中培养。　　药物和动物　　rhTNF-α由厦门特宝生物工程有限公司馈赠，1mg比活性不低于2×107U，-20℃冰箱保存。6-8周龄的B

8、ABL/c裸鼠，体重16