11例慢性乙型肝炎应用细胞因子诱导杀伤细胞治疗的效果观察

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1、11例慢性乙型肝炎应用细胞因子诱导杀伤细胞治疗的效果观察贵阳医学院第二附属医院感染科孙鸿邮编556000屮图分类号:R512.62文献标识码:A【摘要】目的：观察自体细胞因子诱导的杀伤(cytokine-inducedkiller,CIK)细胞治疗慢性乙型肝炎的疗效及安全性，探索慢性乙型肝炎治疗的新策略。方法:采集11例慢性乙型肝炎患者外周血単个核细胞，在体外经干扰素γ、白细胞介素-2、抗CD3单克隆抗体等细胞因子诱导成CIK细胞，分次B体回输，观察治疗前及治疗后第1、4、12周肝功能、HBV血清标志物和HBVDNA水平并进行比较分析，同时

2、对不良反应和肾功能进行评估。结果：11例CIK细胞均诱导成功。在治疗过程屮除回输时大部分患者出现一过性发热外，无其他明显不良反应，肾功能和血细胞无异常变化。治疗结束后随着观察时间的延长，ALT和AST水平等肝功能指标明显改善；治疗结束一周内HBVDNA水平无明显变化，但随着观察时间的延长HBVDNA水平有明显卜降，第1、4、12周以下降2个log为观察指标，其同基线水平相比K降的比例分别为12.5%、31.2%、53.1%。讨论:本研究提示CIK细胞治疗慢性乙型肝炎后在12周观察期内是安全有效的。特别是治疗后随着观察时间的延长，HBVDNA复制水平逐渐

3、K降，提示CIK细胞治疗后可能存在持续的免疫应答反应。［关键词］细胞因子诱导杀伤细胞；治疗；乙型肝炎；效果；观察目前现有的抗病毒药物对慢性HBV感染的疗效不其理想，在临床治疗屮会出现耐药、病毒变异以及药物的毒副作用等因素影响丫治疗效果，同时也增加丫患者的经济负担。HBV感染的控制和病毒的淸除有赖于机体的免疫系统，其感染慢性化与机体特异性免疫(尤其是细胞免疫)功能低K密切相关。树突状细胞(DCs)作为机体免疫反应的起动子，其摄取外源性抗原并通过MHCII类途径递呈给CD4+T细胞，也通过MHCI类途径递呈内化的外源性抗原，DCs能打破机体对多种抗原的免疫

4、耐受，也在机体对某些抗原免疫耐受的建立过程中发挥重要的作用慢性乙型肝炎病毒感染中，DCs表达共刺激分子及MHCII类分子明显低于正常,同吋DCs刺激T淋巴细胞增生和细胞分泌的能力亦低于正常。因此，HBV感染的慢性化与DCs功能缺陷有关.由于DCs功能的缺陷进一步造成CTL功能不足，因而形成HBV慢性持续性感染状态.通过增强或恢复机体HBV特异性免疫功能、以控制和清除HBV感染的免疫治疗是被人们寄予厚望的一种治疗策略，备受关注。细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞1991年由美国斯坦福大学首次报道。CIK细胞是以CD3+CD56+T淋巴细胞为主的异质细胞群，

5、由于该类细胞具冇非人类主要组织相容性复合体限制性、高增殖性、高细胞毒性以及细胞来源丰富等种种优点，0前国内部分大型医院已开始应用于治疗慢性乙型肝炎。我科于2012年9月开展此项技术，共收治乙肝表面抗原阳性患者11例，现报道如下。1.一般资料收集2013年9月1日一2015年8月31日感染科门诊和住院的慢性乙型肝炎患者11例，其中男9例，女2例，年龄平均38.4岁。诊断符合2009年中华医学会肝病学分会和中华医学会感染病学分会所制定的标准.并排除HCV、HDV和HEV等病毒合并或重叠感染。以及洒精性肝炎、自身免疫性肝炎和其他肝脏疾病造成的肝损害。2.方法

6、接受CIK细胞治疗的患者未采取保肝降酶治疗措施或联合K他抗病毒治疗。2.1CIK细胞的培养、制备和回输方法由贵阳医学院免疫实验中心用成分血分离机采集患者外周血单个核细胞。在符台良好操作规范(GMP)的实验室条件下.置于37°C，5%CO2条件下孵育2h,收集非贴壁细胞，加入1000U/ml的IFN-γ培养24h后加入50ng/ml的CD3单克隆抗体和500U/ml的rhlL-2,刺激CIK细胞的生长和增殖；根据生长情况每2-3d进行一次扩瓶传代培养；在第7d,收获CIK细胞，其数量应达到l×109个以上，台盼蓝染色检测细胞活力应

7、在80%以上，用流式细胞仪检测细胞免疫表型，其中CD3+CD56+的细胞应达到20%以上。2.2观察项0治疗前后询问病史，进行系统的体格检查.并在治疗前及治疗结束后第1、4、12周分别检测血渣生化指标、HBV血清标志物及HBVDNA水平。2.3统计学处理用SPSS1.2软件进行统计分析。采用X2检验。P<0.05表示差异有统计学意义。1.结果3.1CIK细胞培养过程中的质量控制每个患者CIK细胞培养过程中均进行过多枚真菌、细菌和支原体检测，结果均为阴性，确保了细胞培养和冋输的安全。流式细胞仪检测CD3+CD56+细胞数占整个细胞培奍数的比在20%

8、以上.3.2CIK细胞冋输后的不良反应在CIK细胞的冋输过程中及冋输后，10例中有2例存在不同