微生物检验原始记录(大肠菌群)

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1、检验原始记录编号：报告类别：微生物共页项目：大肠菌群coliforms检验地点：样品名称：样品编号：样品状态：符合检验要求；其他环境条件：实验依据及步骤GB4789.3-2016样品稀释固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌均质容器内均质，或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中拍击式均质器拍打，制成为1:10样品匀液。依次进行10倍递增稀释。液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中混匀，为1:10样品匀液。样品匀液的ph应在6.5-7.5之间，必要时分别用1m

2、ol/lNaOH或1mol/lHcL调节。取1mL1∶10稀释匀液沿管壁缓缓注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100样品匀液。按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸量管。从样品匀液制备到样品接种完毕，全过程不得超过15min。初发酵试验（9管法）每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤）36℃±1℃培养24h±2h

3、，观察倒管内是否有气泡产生。产气者进行复发酵试验，未产气则继续培养至48±2h，产期进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。复发酵试验（证实试验）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。数据分析与结果一、菌落计数根据证实为大肠菌群的阳性管数，查MPN检索表，报告大肠菌群的最可能数。5一、缓冲液1.磷酸盐缓冲液磷酸二氢钾34.0g蒸馏水500ml（稀释液需要1000ml）贮存液：将34.0g磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/l氢氧化钠溶液调节ph至7.2，用蒸馏

4、水稀释至1000ml后贮存冰箱。稀释液：取贮存液1.25ml用蒸馏水稀释至1000ml分装于适宜容器，121℃高压灭菌15min。2.无菌生理盐水氯化钠8.5g蒸馏水1000ml将称取好的氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。3.PH调节剂1mol/l氢氧化钠溶液称取40g氢氧化钠溶于1000ml无菌蒸馏水中。1mol/lHcL溶液移取Hcl90ml，用无菌蒸馏水稀释至1000ml。二、微生物限量采样方案（根据GB4789.1-2016）1.采样方案分为二级和三级方案，二级采样方案设有n、c、m值，三级采样方案设有n、c、m和M值。n：同一批次产品应采集的

5、样品件数c：最大可允许超出m值的样品数m：微生物指标可接受水平的限量值M：微生物指标的最高安全限量值2.例：n=5,c=2,m=1cfu/g,M=10cfu/g,即从一批产品中采集5个样品，若5个样品的检测结果均小于或等于m值（≤1cfu/g），则这种情况是允许的；若≤2个样品的结果（X）位于m值和M值之间（1cfu/g≤X≤10cfu/g），则这种情况也是允许的；若有3个及以上样品的检验结果位于m和M之间，则这种情况是不允许的；若有任一样品的检验结果大于M（>10cfu/g），则这种情况也是不允许的。检测记录：校对：检测日期：55菌落总数检样原始记录产品名称检测日期时间试样编

6、号初发酵试验未产气培养48±2h复发酵实验（接种BGLB管）结果各试样菌落分析/个结论稀释液及产气管数稀释液及产气管数接种日期时间结果日期时间稀释液及产气管数MPN检索表　　　　　　　　　(CFU/ml)n=5c=2m=102M=104　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　

7、　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　　　1　　　　　　　　　　　　　　2　　　　　　　　　　　　3　　　　　　　　　　　　4　　　　　　　　　　　　5　　　　　　　　　　　　55