正常和6羟多巴胺毁损大鼠脚桥核神经元对胆碱能m受体刺激的反应

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1、正常和6羟多巴胺毁损大鼠脚桥核神经元对胆碱能M受体刺激的反应（.lunicnucleus,STN)和额叶皮质的谷氨酸能神经纤维[12]。PPN的上行传出纤维主要投射到黑质致密部(substantianigraparspact,SNc)、STN、EP、苍白球、纹状体和丘脑;下行传出纤维主要投射到延髓[12]。　　研究表明在帕金森病(Parkinsonsdisease,PD)动物模型中PPN神经元的电活动显著增强[3]。最近研究发现在6羟基多巴胺(6hydroxydopamine,6OHDA)毁损的PD模型大鼠中，PPN

2、内细胞色素氧化酶mRNA的表达量增加[4]。这些研究结果提示了黑质纹状通路损毁后PPN处于过度活动状态。另外，原位杂交研究显示PPN神经元上有胆碱能M2、M3和M4受体亚型的表达，且M2受体表达的密度最高[5]。然而，在正常和PD状态下PPN内M受体的功能尚不清楚。因此，本研究采用玻璃微电极细胞外记录法，观察了PD模型大鼠PPN神经元电活动的变化，以及PPN内微量注射选择性胆碱能M受体激动剂氧化震颤素(oxotremorineM,OxoM)对正常和PD模型大鼠PPN神经元活动的影响，旨在探讨M受体在正常和PD状态下在PPN神经元

3、活动中的作用。　　1材料与方法　　1.1动物和药物实验选用成年、雄性SD大鼠，体重220～260g，由西安交通大学实验动物中心提供。动物分笼饲养，每笼5只，自由摄食饮水，24h昼夜循环光照。实验所用药物地昔帕明、6OHDA、OxoM和盐酸阿朴吗啡均购自美国Sigma公司。地昔帕明、阿朴吗啡和OxoM均溶于无菌生理盐水;6OHDA溶于含0.1g/L抗坏血酸的生理盐水中。　　1.2PD模型的制备在注射6OHDA前30min，先给大鼠注射地西帕明(25mg/kg，i.p.)以保护去甲肾上腺素能神经元。大鼠用40g/L水合氯醛(

4、300mg/kg，i.p.)麻醉后将其头部固定于脑立体定位仪上(SN2N，Narishige，日本)，根据大鼠脑立体定位图谱确定右侧SNc的坐标位置：前囟后4.9～5.3mm，矢状缝右侧1.8～2.2mm，硬脑膜下7.2～7.4mm[6]。微量注射使用尖端与玻璃微电极相连的10μL微量注射器，分两点在SNc内注射6OHDA，每个注射位点给予2μL6OHDA溶液(2g/L)，总量2g/L。注射完后留针5min，然后缓慢退出玻璃微电极。术后两周进行阿朴吗啡诱导的旋转实验，给大鼠注射阿朴吗啡(0.05mg/kg，s.c.)，大鼠在

5、5min内向损毁侧的对侧旋转超过20圈，表明造模成功[3,7]。　　1.3电生理记录及放电形式分析电生理记录在SNc损毁后第3周进行，整个实验过程监测大鼠心率，肛温维持在(37±0.5)℃。大鼠用200g/L乌拉坦麻醉(1.2g/kg，i.p.)后固定于脑立体定位仪上，采用在体玻璃微电极细胞外记录法记录PPN神经元放电，电极尖端直径1～2μm，阻抗10～20MΩ，充灌液为0.5mol/L的醋酸钠，含20g/L滂胺天蓝。根据大鼠脑立体定位图谱确定右侧PPN的位置：前囟后7.3～8.3mm，矢状缝右侧1.6～2.0mm，硬脑膜下6.2

6、～7.2mm[6]。神经元放电经微电极放大器(MEZ8201,NihonKohden，日本)，显示于记忆示波器上(VC11,NihonKohden，日本)，神经电信号经CED1401Spike2(CambridgeElectronicDesign，英国)采集和分析。　　根据放电间隔直方图(interspikeintervalhistogram,ISIH)，并结合原始放电序列，将神经元的放电形式分为以下3种类型：①规则放电：ISIH呈对称分布;②不规则放电：ISIH呈随机不对称分布;③爆发式放电：ISIH呈逐渐衰减的正偏态分布。

7、每一个ISIH的生成最少包含500个连续的动作电位，bin宽4ms。另外，根据ISIH计算出平均放电间隔的变异系数。变异系数是放电间隔的标准差与平均放电间隔之比，反映神经元电活动的规则程度[3,7]。　　1.4局部给药PPN内微量注射使用与1μL微量注射器相连接的玻璃微电极，微电极尖端直径约50μm。将给药微电极和记录微电极固定于微电极操纵器上，调整两个电极使其尖端的位置非常接近(小于0.4mm)。核团内微量注射药物或盐水的剂量均为200nL，约3min注完。一般情况下，微量注射的机械作用会引起神经元的放电幅度降低，这种作用约持续

8、1min。因此，在统计数据时，微量注射后1min内的放电活动不予计算。每个神经元在给药前记录5min自发放电作为前对照，给药1min后记录5～10min以观察给药后神经元电活动的变化。与前对照相比，放电频率的改变超过20%则认为有显著性变化。每只大