基于coi序列的哈蟆油基原动物dna条形码鉴定研究

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1、基于COI序列的哈蟆油基原动物DNA条形码鉴定研究　　[摘要]哈蟆油具有较高的经济和社会价值，其混伪品较多，给市场造成了很大的混乱。利用基于COI序列的DNA条形码技术对已鉴定的东北林蛙、中国林蛙、桓仁林蛙和黑龙江林蛙进行PCR扩增和测序，建立4种林蛙COI基因数据库；将所测的序列与GenBank上的序列进行比对，显示为上述4种林蛙；应用MEGA（molecularevolutionarygeneticsanalysis）7.0软件计算K2P遗传距离并构建NJ（neighbor-joining）系统聚类树，所测4

2、种林蛙的序列和GenBank上下载的4种林蛙的序列分别聚为1支，但与GenBank上下载的2个外群独立分开，东北林蛙的COI基因可能存在地域性差异，但该技术并不能鉴别林蛙的雌雄。结果显示DNA条形码技术能够准确鉴定哈蟆油的基原动物，说明DNA条形码COI为哈蟆油基原动物的鉴定提供一个新的手段和方法。　　[关键词]哈蟆油；东北林蛙；中国林蛙；DNA条形码；鉴定　　IdentificationofRanaeOviductusoriginalanimalbasedonCOIsequences　　WANGMeng-hu，

3、KANGTing-guo*，XULiang*，YANGYan-yun，CAIZhen-jiao　　（LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine，Dalian116600，China）　　[Abstract]RanaeOviductushasahigheconomicandsocialvalue，butitsadulterantsaremorenumerous，whichcausesagreatconfusiontothemarket.UsingDNAbarcode

4、technologybasedonCOIsequenceforPCRamplificationandsequencingoftheidentifiedRanadybowskii，R.chensinensis，R.huanrensisandR.amurensiss，theCOIgenedatabaseoffourspeciesofRanawasestablished，andcomparingthemeasuredsequencewiththesequenceofGenBank，fourkindsofRanawere

5、identified.TheMEGA（molecularevolutionarygeneticsanalysis）7.0softwarewasusedtocalculatethegeneticdistanceofK2PandconstructtheNJ（neighbor-joining）systemclustertree.ThesequenceofthefourspeciesofRanameasuredwereclusteredintoonegroupwiththesequenceofthefourkindsof

6、RanadownloadedfromGenBank，butseparatedfromthetwooutergroupsdownloadedfromGenBank.TheCOIgeneoftheR.dybowskiiwaslikelytohaveregionaldifferences，howeverthistechniquefailedtodistinguishmaleandfemaleRana.TheresultsshowedthatDNAbarcodetechnologycouldaccuratelyident

7、ifythebaseoforiginalanimalofR.oviductus.ItindicatesthatDNAbarcodeCOIprovidesanewmethodfortheidentificationofR.oviductus.　　[Keywords]RanaeOviductus；Ranadybowskii；Ranachensinensis；DNAbarcode；identify　　哈蟆油作?槊?贵动物药及滋补品，其性平，味甘、咸，归肺、肾经，具有补肾益精，养阴润肺的功效[1]。哈蟆油作为辽药六宝之一

8、和辽宁特色的满药品种，其基原动物主要分布在长白山地区。过去在中国分布的林蛙命名比较混乱，各地区的林蛙命名经过几次变动。自1985年版《中国药典》至今记载哈蟆油的基原动物为中国林蛙Ranatemporariachensinensis[1]，近年来部分学者认为哈蟆油的基原动物为东北林蛙R.dybowkii[2-7]，我课题组对哈蟆油的基原动物进行考证，认为哈蟆油的基原动物为东