基于coi序列的哈蟆油基原动物dna条形码鉴定研究

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1、基于COI序列的哈蟆油基原动物DNA条形码鉴定研究[摘要]哈蟆油具有较高的经济和社会价值，其混伪品较多，给市场造成了很大的混乱。利用基于COI序列的DNA条形码技术对已鉴定的东北林蛙、中国林蛙、桓仁林蛙和黑龙江林蛙进行PCR扩增和测序，建立4种林蛙COI基因数据库；将所测的序列与GenBank上的序列进行比对，显示为上述4种林蛙；应用MEGA（molecularevolutionarygeicsanalysis）7.0软件计算K2P遗传距离并构建NJ（neighbor-joining）系统聚类树，所测4种林蛙的序列和GenBank上下载的4种林蛙的序列分别聚为1支，但与GenBank上

2、下载的2个外群独立分开，东北林蛙的COI基因可能存在地域性差异，但该技术并不能鉴别林蛙的雌雄。结果显示DNA条形码技术能够准确鉴定哈蟆油的基原动物，说明DNA条形码COI为哈蟆油基原动物的鉴定提供一个新的手段和方法。中国1/vie　　[关键词]哈蟆油；东北林蛙；中国林蛙；DNA条形码；鉴定　　IdentificationofRanaeOviductusoriginalanimalbasedonCOIsequences　　eng-hu，KANGTing-guo*，XULiang*，YANGYan-yun，CAIZhen-jiao　　（LiaoningUniversityofTraditi

3、onalChineseMedicine，Dalian116600，China）　　[Abstract]RanaeOviductushasahigheconomicandsocialvalue，butitsadulterantsaremorenumerous，arket.UsingDNAbarcodetechnologybasedonCOIsequenceforPCRamplificationandsequencingoftheidentifiedRanadybourensiss，theCOIgenedatabaseoffourspeciesofRanaeasuredsequenceol

4、ecularevolutionarygeicsanalysis）7.0softclustertree.ThesequenceofthefourspeciesofRanameasuredGenBank，butseparatedfromthetGenBank.TheCOIgeneoftheR.dyboaleandfemaleRana.TheresultsshoalofR.oviductus.ItindicatesthatDNAbarcodeCOIprovidesaneethodfortheidentificationofR.oviductus.　　[Keyporariachensinens

5、is[1]，近年来部分学者认为哈蟆油的基原动物为东北林蛙R.dybowkii[2-7]，我课题组对哈蟆油的基原动物进行考证，认为哈蟆油的基原动物为东北林蛙。《四库全书・盛京通志》记载“山蛤……多伏岩中，似�r�W而大，腹黄红色，俗称哈什蟆……”；《辽海丛书・沈故篇》记载“哈什马形似田鸡，腹有油如粉条，有子如鲜蟹黄，取以作羹，味极肥美，然唯与京一带有之。满洲人用以祭祖，取其��也　　。”[8]根据上述记载，“盛京”、“兴京”分别指今天的辽宁省沈阳市、辽宁省新宾满族自治县，说明哈蟆油的基原动物分布在辽宁地区，现在辽宁新宾依然是哈蟆油的主产区之一。本实验收集长白山地区的东北林蛙、桓仁林蛙和黑

6、龙江林蛙与内蒙古地区的中国林蛙，并鉴定为上述4种林蛙。提取4种林蛙的总DNA，进行PCR扩增并测序，将所测序列与GenBank上的序列进行比对。本实验首次利用DNA条形码技术鉴定4种林蛙和对不同地域的东北林蛙进行鉴别，结果显示DNA条形码技术能够准确鉴定哈蟆油的基原动物；东北林蛙线粒体COI基因的2个位点呈现地域性的变异，该变异位点是否具有稳定性需要进一步研究。