基于ITS2条形码序列的山豆根基原植物及其混伪品的DNA分子鉴定-论文.pdf

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1、世界科学技术一中医药现代化★专题讨论之一：中药资源可持续利用的技术研究摘要：山豆根是我国常用中药材，对山豆根基原植物及其易混伪品进行DNA分子鉴定研究具有重要意义。本文对5科9属38个物种84份山豆根基原植物及其混伪品样品的ITS2序列进行序列变异分析、K一2p遗传距离比较及NJ系统发育聚类树构建。结果表明所研究山豆根基原植物样品种内ITS2序列无变异，与其同属密切相关物种的ITS2序列变异位点为102个，平均K一2p遗传距离为0．072，与其他混伪品的ITS2序列变异位点为200个，平均K一2p

2、遗传距离为0．594。山豆根基原植物在NJ系统发育聚类树上聚为一支，支持率为98。因此，ITS2作为DNA条形码序列能够有效的区分山豆根基原植物及其混伪品，为山豆根药材及其混伪品的鉴定提供基础。关键词：山豆根越南槐混伪品ITS2鉴定doi：10．3969／j．issn．1674—3849．2012．01．002据中国药典2010年版一部记载lll，山豆根的正蓝山豆根(来源为豆科植物多花木蓝Indigoferaaln—品来源为豆科Fabaceae植物越南槐Sophoratonki—blyanthaC

3、raib、花木蓝IndigoferakirilowiiMaxim．exnensisGagnep．的干燥根和根茎，分布于广西、广东、Palibin等几种同属植物)，滇豆根(来源为毛茛科云南等省份。山豆根具有清热解毒，消肿利咽之功Ranunculaceae植物铁破锣Beesiacalthifolia(Maxim．)效，用于治疗火毒蕴结，乳蛾喉痹，咽喉肿痛，口舌生Ulbr．)朱砂根(来源为紫金牛科Myrsinaceae植物朱砂疮等症。苦，寒，有毒，归肺胃经。由于历史及各地民根Ardisiacrenata

4、Sims)，百两金Ardisiacrispa间用药习惯不同，山豆根的植物来源比较复杂，混伪(Thunb．)A．DC．(紫金牛科)、胡枝子Lespedezabi—品较多[2】，主要有北豆根(来源为防己科Menisper—colorTurcz．(豆科)，鸡骨香CrotoncrassifoliusGeise1．maceae植物蝙蝠葛MenispermumdauricumDC．)，木(大戟科Euphorbiaceae)，镰扁豆DolichostrilobusL．(豆科)。除此之外，山豆根基原植物越南槐的同

5、属密收稿日期：2012-0l一13切相关物种由于形态及药材性状相似，也易成为混修回日期：2012-02-l3★_y_tk部卫生行业科研专项(200802043)：药用植物DNAbarcoding(条形码)鉴定研究，负责人：陈士林。★★通讯作者：姚辉，副研究员，硕士研究生导师，主要研究方向：中药资源可持续利用，Tel：010—57833194，E-mail：scauyaoh@sina．corn；陈士林，本刊编委，教授，博士，中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所所长，主要研究方向：中药资源学，E

6、-mail：slehen@implad．ae．an。[WorldScienceandTechnology／ModernizationofTraditionalChineseMedicineandMateriaMedica]11472012第十四卷第一期★Vo1．14No．1伪品的来源。一近年来，由于物种鉴定错误，混伪品相互替代使、材料与方法用等原因，有关山豆根中毒的病例时有发生[6-71。为快1．植物材料速、准确鉴定山豆根及其混伪品，本研究使用DNA植物材料来源及GenBank登录号见表1，共5科

7、条形码鉴定技术，采用ITS2DNA条形码片段对山豆9属38个物种84个样品。12个实验样品经中国医根基原植物越南槐及其同属28个物种，以及其他9学科学院药用植物研究所林余霖副研究员鉴定，凭个混伪品物种进行DNA条形码鉴定研究，可为山豆证标本保存于中国医学科学院药用植物研究所。72根药材及其混伪品的鉴定提供基础，为确保山豆根个来源于GenBank的ITS2序列处理流程参考姚辉等药材的质量及临床用药安全提供参考。的研究【。表1材料来源及GenBank登录号1148[WorldScienceandTec

8、hnology／ModernizationofTraditionalChineseMedicineandM~edaMedical世界科学技术一中医药现代化★专题讨论之一：中药资源可持续利用的技术研究2．二、结果与分析(1)DNA提取。对12个实验样品，分别取硅胶干燥的植物叶片1．ITS2序列长度、GC含量、Polv结构及序列差异3Omg，用DNA提取研磨仪(RetschMM400，Ger—两份山豆根基原植物越南槐样品的ITS2序列长many)研磨1min(30次／s)，利用植物DN